17β-雌二醇对脂蛋白诱导内皮细胞产生炎性细胞因子的影响

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1、17β-雌二醇对脂蛋白诱导内皮细胞产生炎性细胞因子的影响　　第二军医大学学报1999年第20卷第12期马丽萍　张国元　秦永文　吴宗贵　侯　健　丁思奇　　摘　要　目的：研究低密度脂蛋白(LDL)和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)对内皮细胞产生炎性细胞因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF)的影响及17β-雌二醇对此的作用。方法：以体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为模型。将LDL、oxLDL与HUVEC孵育，及HUVEC经他莫昔芬(tamoxifen)和（或）17β-雌二醇预处理后，再与LDL、oxLDL孵育，检测培养液中IL-6和TNF活性。结果：LDL和oxLDL可明显促进

2、内皮细胞产生IL-6和TNF。LDL100μg/ml时，TNF为（0.74±0.09）ng/ml，IL-6为（91.64±7.39）U/ml,P＜0.01;oxLDL20μg/ml时，TNF为（0.72±0.08）ng/ml，IL-6为（92.28±6.29）U/ml,P＜0.01。经17β-雌二醇预处理后，细胞在LDL或oxLDL作用下，IL-6和TNF活性与对照组相比无显著性差异（P＞0.05）；他莫昔芬和17β-雌二醇同时处理后，再加LDL或oxLDL，IL-6和TNF活性增高，与对照组相比有显著性差异（P＜0.05，p＜0.01）。结论：LDL和oxLDL可促进血管内皮细胞产生炎性细

3、胞因子IL-6和TNF，而雌激素对此有明显抑制作用；该抑制作用可能部分通过血管内皮细胞上的雌激素受体而实现。　　关键词：内皮，血管　雌二醇　脂蛋白类，LDL　细胞因子　　女性在绝经前冠心病的发病率远低于同龄男性，绝经后冠心病发病率明显升高。对绝经妇女采用雌激素替代疗法，其冠心病发病率可减少约50%［1］，表明女性在绝经前的这种优势主要与雌激素的保护作用有关。近年的研究表明，雌激素在体内可通过多种途径发挥对心血管系统的保护作用，使冠心病病死率降低［2］。但雌激素心血管保护作用的具体机制尚不明确。　　学术界近年来认为，动脉粥样硬化是由于动脉壁的内皮细胞和血管平滑肌细胞受多种危险因子的损伤而使机体

4、产生的一种过度的炎症增生性反应过程。大量的生长因子、细胞因子和血管调节因子参与了此反应过程［3］。国外临床资料显示，绝经后妇女血清总胆固醇和低密度脂蛋白（LDL）水平升高，高密度脂蛋白（HDL）降低；雌激素替代疗法可减少LDL，增加HDL水平［4］。增高的LDL对与动脉粥样硬化发生发展关系较密切的白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子（TNF）的影响未见报道。为此我们观察了脂蛋白对血管内皮细胞产生炎性细胞因子的影响及雌激素对此的作用，以进一步明确雌激素的血管保护作用机制。　　1　材料和方法　　1.1　材料　17β-雌二醇、胶原酶、LDL、他莫昔芬(tamoxifen)均为Sigma产品；B9

5、细胞为长征医院血液科侯健教授惠赠；RPMI1640、48孔培养板均为Gibco产品。氧化低密度脂蛋白（oxLDL）制备:LDL置于含Cu2+（10μmol/L）的MEM液中，37℃温育20h，氧化程度用硫巴比妥反应产物法测定［5］。17β-雌二醇和他莫昔芬溶于无水乙醇，过滤除菌，并使培养基中的乙醇控制在0.1%以下。　　1.2　方法　　1.2.1　人脐静脉内皮细胞培养［6］　取新生儿脐带，用胶原酶消化。以含20%小牛血清的RPMI1640培养液培养。根据细胞呈单层铺路石状排列及Ⅷ因子阳性鉴定为内皮细胞。　　1.2.2　分组　实验采用生长呈融合状态的原代培养内皮细胞。(1)对照组：正常生长内皮

6、细胞，以无血清RPMI1640培养液培养；(2)LDL组：不同浓度LDL（50,100,200μg/ml），以无血清RPMI1640培养液补足，培养24h；(3)oxLDL组：不同浓度oxLDL(5,10,20,40μg/ml),以无血清RPMI1640培养液补足，培养24h；(4)雌激素组：经17β-雌二醇10－7mol/L预处理24h后，分别加LDL100μg/ml或oxLDL20μg/ml，以无血清RPMI1640补足，培养24h；(5)他莫昔芬组：经他莫昔芬10－4mol/L和17β-雌二醇10－7mol/L处理24h后，分别加LDL100μg/ml或oxLDL20μg/ml，无血清

7、RPMI1640补足，培养24h。每孔均500μl。标本于-20℃保存。　　1.2.3　指标测定　用放射免疫测定盒（购自上海长征医学科学有限公司）测TNF；MTT比色法检测IL-6［7］。　　1.3　统计学处理　各组实验数据以X±s表示，资料采用方差分析，SNK法两两比较。　　2　结果　　2.1　LDL对血管内皮细胞产生IL-6和TNF的影响　当LDL终质量浓度为50～200μg/ml时，经24h刺激，血管内