综合实训4革兰阴性需氧和兼性需氧杆菌

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1、革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌xiaobinxuer@163.comA肠杆菌科埃希菌沙门菌志贺菌克雷伯菌变形杆菌肠杆菌耶尔森菌B弧菌科弧菌属气单胞菌邻单胞菌C非发酵菌假单胞菌产碱杆菌不动杆菌其它非发酵菌革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌革兰阴性杆菌O-F试验F－o/－非发酵菌氧化酶试验+弧菌科肠杆菌科革兰阴性菌初步分群乳糖发酵试验A肠杆菌科共同特性1、相似的形态染色中等大小，G–杆菌，无芽胞，多数有动力2、简单的培养条件3、活泼的生化反应初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌肠道致病菌肠道非致病菌不发酵乳糖发酵乳糖A肠杆菌科的鉴别1、形态观察（革兰染色）G–杆菌2、菌落观察（

2、1）埃希菌在肠道选择性培养基上发酵乳糖产酸，在SS和MAC平板上为红色或粉红色菌落(2)志贺菌属：将本菌接种在SS和MAC平板上经35℃孵育18～24h。由于志贺菌不分解乳糖，宋内志贺菌某些菌株可迟缓发酵乳糖，故其在SS平板和MAC平板上形成无色透明的、中等大小的菌落。除宋内志贺菌菌落外均为光滑型菌落。(3)沙门菌属：将本菌接种在SS、MAC平板上经35℃孵育18～24h。由于本菌不分解乳糖并产碱，故在SS和MAC平板上形成无色、半透明、光滑湿润、凸起的小菌落，产生H2S的菌落可在SS平板上形成中心带黑褐色的小菌落。3、生化反应4、血清学实验革兰阴性杆菌，有

3、周身鞭毛。发酵多种糖类，多数能发酵乳糖，产酸产气IMViC试验为++--，MIU:++-,KIA:AA+-不产H2S大肠杆菌血清型以O：K：HA1埃希菌能分解葡萄糖，产酸不产气，不分解乳糖,除宋内志贺菌IMViC试验为-+--，MIU:---,KIA:KA--,不产H2S是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌dysenterybacteria无鞭毛，有菌毛生化反应形态A2志贺菌低于其他肠道杆菌，对酸敏感对理化因素的抵抗力血清学：根据生化反应特征和O抗原分为4群肝脾-肿大胆囊-肠道-排菌(2周）肾脏-尿-排菌（3周)A3伤寒、副伤寒的致病过程伤寒沙门菌

4、和甲型副伤寒杆菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌肠粘膜上皮细胞肠系膜淋巴结固有层淋巴结进入血液再次进入血液第一次菌血症发热,不适,全身疼痛第二次菌血症（1周）高热、外周白细胞下降、肝脾肿大、表情冷漠、玫瑰疹、相对缓脉肝脏脾脏胆囊肾脏骨髓并发症肠穿孔肠出血典型病例病程为3-4W胸导管微生物学检查法细菌学诊断标本：胃肠炎取粪便呕吐物或可疑食物肠热症在病程不同阶段采取不同标本；发病1周取血；发病1-3周取骨髓液发病2周取粪便；发病3周取尿微生物学检查细菌学诊断标本肠热症食物中毒败血症第1周取静脉血可疑食物血第1-3周取骨髓液呕吐物第2周起取粪粪第3周起取尿SS平板生化反应

5、血清学鉴定双糖发酵等玻片凝集试验沙门菌生化反应KIA:K/A-+,H2S阳性,赖氨酸脱羧酶阳性,IMVC:-+-+,MIU:+--沙门菌血清学鉴定—肥达氏反应一、原理用已知的标准诊断菌液【伤寒杆菌：菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原；副伤寒甲、乙、丙鞭毛（H）抗原共5种】与受检血清作试管凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价，以协助伤寒、副伤寒疾病的诊断。二、器材及试剂标准诊断菌液（5种抗原：10ml/瓶）、生理盐水（N.S）、待检血清（兔血清）、试管、试管架、加样枪或移液管（5mL、2mL、0.5mL每组3支）、一次性塑料滴管等。1三、实验方法1.冰箱中

6、取出诊断菌液平衡至室温。2.将待检血清作1：20、1：40、…..1：1280（每管0.5ml，每个稀释倍数5管）稀释，对照管加N.S0.5ml,然后逐管加入混匀后诊断菌液1d，充分振荡混匀，标记（时间、班级、组号），35~37°C放置16-20h观察结果。（配液管：0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL:1：20）3.5/6个同学一组，第二天中午1:30观察结果。1:201:401:801:1601:3201:6401:1280伤寒O抗原0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL:1：202.5ml2.5ml2.5mlN.S余2.5ml平分

7、为5管，每管0.5ml：得5管1:20稀释倍数的血清平分为5管，每管0.5ml：得5管1:40稀释倍数的血清2.5mlN.S余2.5ml1:12801:201:401:801:1601:3201:640伤寒H抗原副甲H抗原副乙H抗原1:12801:201:401:801:1601:3201:6401:12801:201:401:801:1601:3201:6401:12801:201:401:801:1601:3201:640副丙H抗原1:201:401:801:1601:3201:6401:1280伤寒O抗原0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL

8、:1：20四、凝集结果判断（上清液、沉淀）“＋＋＋＋