革兰氏阴性需氧杆菌

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1、第四章革兰氏阴性需氧杆菌布氏杆菌又名布鲁氏菌,1887年Bruce从死亡士兵脾脏中分到第一株布鲁菌，可引起多种动物发病。主要寄居于肝、脾和淋巴组织内的单核细胞中，是胞内寄生菌。布氏杆菌属（Brucella）主要侵害：生殖器官和关节主要特征是：生殖器官、胎膜以及多种器官组织发炎、坏死和肉芽肿的形成，引起流产、不孕、睾丸及关节炎症等症状。人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。一、形态及染色特性球形、球杆形或短杆形，新分离者趋向球形。多单在，不形成芽胞和荚膜，无鞭毛不运动。革兰氏染色阴性，但着色不佳。柯

2、兹罗夫染色法染成红色，其他菌呈绿色或蓝色。二、培养特性本菌专性需氧，在初代分离培养时尚需5%-10%CO2，泛酸钙和内消旋赤藓糖醇可刺激某些菌株生长。在培养基中加入少量血液、血清或肝浸液可促进生长，不溶血。生长缓慢，常需5-10d甚至20-30d。液体培养基上呈轻微浑浊生长，时间长可形成很厚的菌膜；在固体培养基上有S、M、R型菌落，大小不一。三、抗原性及变异性（一）属内抗原：A、M、R抗原光滑型布氏杆菌有A和M二种菌体抗原成分(外露的多糖侧链），是细菌的凝集抗原，各菌种含量不同。与S型菌发生交叉凝集。R抗原：

3、非S型菌的共同抗原，不与S型菌发生凝集。变异：S→R丧失A、M抗原，暴露R抗原（二）属外抗原可与巴氏杆菌、变形杆菌、大肠杆菌等属细菌发生交叉凝集反应。1）A抗原与M抗原是细胞壁表面的脂多糖蛋白复合物。光滑型布氏杆菌具有A和M两种表面抗原，两者含量有差异（约1：20），流产布氏杆菌以A为主，马尔他布氏杆菌以M抗原为主，分别能与相应的单项抗血清表现凝集反应。猪布氏杆菌两种抗原含量相近，可凝集两种单相抗血清。因此，可用凝集试验鉴别种和生物型2）R抗原为细胞壁中的脂多糖复合物。是大多数非光滑型布氏杆菌的共同抗原决定簇

4、，其抗血清可与绵羊种和犬种布氏杆菌凝集光滑型菌株发生S到R的变异后，丧失A和M抗原后，暴露出R抗原，可与R抗血清发生凝集。绵羊种和犬种布氏杆菌是天然的R型种，其他种为S型。2、属外抗原是指布氏杆菌能与巴氏杆菌、变形杆菌、弗朗西斯杆菌、弧菌、弯曲菌、钩端螺旋体、假单胞菌、沙门氏菌、耶耳森菌和大肠杆菌等属的细菌发生交叉反应的抗原。五、变异性1、布氏杆菌最常见的变异是S→R变异，此种变异很少发生回变2、发生S→R变异后，细菌特异性多糖链发生改变，丧失A和M抗原。3、变异细菌毒力减弱，凝集原性较差，对吞噬细胞缺乏抵抗

5、力，同时易于发生自凝现象。四、种及致病性（一）分类6个种马耳他布氏杆菌Br.melitensis（羊型）1-3流产布氏杆菌Br.abortus（牛型）1-9猪布氏杆菌Br.suis1-5绵羊布氏杆菌Br.ovis沙林鼠布氏杆菌Br.neotomae犬布氏杆菌Br.canis其中1、2、3三个种危害最大，我国流行的也主要是这三种，其中以羊布氏杆菌病最为多见。：羊种天然感染羊，猪种天然感染猪，牛种感染牛但1、2、3可以互相感染，同时对人、马等动物都能致病，人类感染以羊种最多见，且毒力最强，猪种次之，牛种最弱布氏杆

6、菌可通过胎盘、羊水、流产胎儿、乳汁、阴道分泌物、精液等排出体外，通过皮肤、伤口、消化道、呼吸道、眼结膜、交配等途径感染。主要致病物质有内毒素、荚膜和透明质酸酶。侵袭力强，可通过完整的皮肤、粘膜进入体内，并有很强的繁殖与扩散能力。动物体内常局限于腺体组织与生殖器官（与赤藓醇含量较高有关），故病畜主要表现为睾丸炎、附睾炎、乳腺炎、子宫炎等。孕期动物对布氏杆菌最敏感，感染后常引起流产。（二）致病性细菌学检查：柯兹罗夫斯基染色。血清学检查：用已知的布氏杆菌检查动物的血清抗体凝集试验（虎红平板凝集试验）感染初期检测。大

7、动物血清凝集价达1：100时阳性，1：25可疑；小动物1：50为阳性，1：25为可疑。补体结合试验慢性布氏杆菌病诊断。规定1：10被检血清阻止溶血在50%以上即阳性。变态反应检测不宜作早期诊断。布氏杆菌水解素注射，观察红肿反应。1-2cm为弱+；2-3cm为+；4-6cm为强+。五、微生物学诊断微生物学诊断布氏杆菌病常表现为慢性或隐性感染，其诊断和检疫主要依靠血清学检查及变态反应检查，细菌学检查仅用于发生流产的动物和其他特殊情况。发达国家规定凡涉及本菌样本检测应在生物安全2级实验室进行涉及本菌培养则需在生物安

8、全3级实验室操作分离培养直接涂片、柯氏与革兰氏染色、显微镜检含菌量少的病料用肝汤或胰化酪蛋白大豆胨液增菌肝汤琼脂或胰化酪蛋白大豆琼脂或血平板直接划线纯培养生化试验血清学试验种及生物型的鉴定阳性者动物试验，豚鼠最易感，小鼠和家兔有低抗力病料（一）细菌学诊断——鉴定程序如下最好用流产胎儿的胃内容物、肺、肝和脾以及流产胎盘和羊水等。也可采用阴道分泌物、乳汁、血液、精液、尿液以及急宰病畜的子宫、乳房、精囊、