工学微生物12革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌自制课件

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1、第十二章革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌本章内容革兰阳性无芽胞杆菌白喉棒状杆菌产单核细胞李斯特菌红斑丹毒丝菌革兰阳性需氧芽胞杆菌属炭疽芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌教学要求掌握白喉棒状杆菌、炭疽芽孢杆菌生物学性状与微生物学检验。熟悉产单核细胞李斯特菌的生物学性状与微生物学检查法。了解红斑丹毒丝菌、蜡样芽胞杆菌的生物学性状与微生物学检查第一节革兰阳性无芽胞杆菌（一）生物学特性1.形态结构：革兰氏染色阳性，菌体细长弯曲，一端或两端膨大呈棒状，常排列呈V、L等文字形。无鞭毛、无荚膜、无芽胞。用亚甲蓝或奈瑟染色，菌体一端、两端或

2、中央可见明显的浓染颗粒，称为异染颗粒，主要成分是核糖核酸和多磷酸盐。一、白喉棒状杆菌电镜下的白喉杆菌形态与染色革兰染色白喉棒状杆菌2.培养特性：本菌为需氧或兼性厌氧菌。对营养要求较严格，在一般培养基上不生长。在吕氏血清斜面上生长快，菌落为细小有光泽、圆形、灰白色、凸起、光滑的菌落；涂片染色菌体形态典型、异染颗粒明显。在亚碲酸钾血平板上，可形成黑色或灰黑色菌落。此培养基可作为选择和鉴定之用。在麦康凯平板上不生长。血平板上菌落亚碲酸钾血平板菌落：3.生化反应发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气。触酶和硝酸盐还原试验

3、阳性，氧化酶阴性。不分解尿素，不产生吲哚。4.抵抗力对热抵抗力强，煮沸1分钟死亡。对干燥、寒冷和日光的抵抗力较其他无芽胞细菌强，对一般消毒剂敏感。（二）微生物学检验标本的采集鉴定直接涂片分离培养毒力试验用无菌长棉拭子从疑为假膜的边缘采取分泌物，也可采取鼻咽部或扁桃腺分泌物。作培养时应在抗生素前采取，如不能立即送检，应将标本浸于无菌生理盐水或15%甘油中，标本应取双份。1.标本的采集2.鉴定直接涂片染色镜检革兰染色：观察形态、染色异染颗粒染色：观察异染颗粒初步报告：检出具有异染颗粒的革兰阳性杆菌分离培养：同

4、时接种血平板及吕氏斜面或亚碲酸钾血平板吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显亚碲酸钾血平板：黑色菌落鉴定要点革兰阳性，着色不均匀，菌体细长弯曲，排列不规则，有X、V形态，具有异染颗粒触酶阳性，无动力，无芽胞吕氏血清斜面的菌落：灰白色、隆起、湿润亚碲酸钾血平板的菌落：黑色或灰黑色毒力试验人类临床标本中检出白喉棒状杆菌，并非都能产生毒素，产生外毒素的菌株是由于携带β-棒状杆菌噬菌体。可用Elek琼脂扩散法体外试验或用动物体内毒力测定。(1)琼脂平板毒力试验：将含有20％牛血清肉汤琼脂注于平皿中，将浸有lOO

5、u／ml抗毒素血清的滤纸条沉于琼脂内，在与滤纸条垂直方向将待检菌划线接种，同时接种标准产毒株作为阳性对照。37℃培养24—48h，若菌苔两侧出现斜向外侧延伸的乳白色沉淀线，并与其邻近的标准产毒株的沉淀线相吻合，则为产毒株。Elek平板试验结果沉淀线(阳性)含白喉抗毒素滤纸片白喉杆菌菌苔(2)动物试验采用家兔皮内试验法。取待检菌的48h肉汤培养液O．2ml，注射在去毛的一侧体壁皮内，5h后注射500U白喉抗毒素血清，30min后再次注射同样的培养液于动物去毛的另一侧体壁皮内作为对照。经24—72h后，若注射

6、抗毒素前接种培养液的部位发生红肿与坏死，而对照部位不发生任何变化，则说明待检菌株具有毒力。（三）临床意义传染源：患者或带菌者致病物质：白喉外毒素（由携带β-棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生）经呼吸道飞沫感染，引起白喉。假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用二、产单核细胞李斯特菌（一）生物学特性（二）微生物检验（三）临床意义（一）微生物特性形态与染色：G+短小杆菌或球杆菌，常成双排列，无芽胞培养特性：最适30～37℃，4℃能生长，在血

7、琼脂平板上，形成较小、圆形、光滑而有狭窄β-溶血环的菌落，耐8.5%NaCl，半固体培养中动力阳性（倒伞形，是本菌特征之一）。生化反应：触酶（+），甲基红（+），VP（+），CAMP（+），发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖等，产酸不产气（二）微生物学检验标本采集：血液、脑脊液、分泌物及病变组织等鉴定：直接涂片：脑脊液离心后取沉淀涂片，其它直接涂片分离培养：脑脊液：血琼脂平板血标本：增菌后，再接种血琼脂平板咽拭子、组织和粪便等：接种于肉汤培养基中，置于4℃冰箱中冷增菌，然后转种于血琼脂平板（二）微生物学检验鉴定特点

8、：G+杆菌，细菌在湿片中呈翻筋斗运动，触酶阳性等（三）临床意义李斯特菌属有7个种，只有该菌对人和动物致病分布广泛，土壤、水、植物、人和动物粪便中均存在，亦可自甲壳动物、蝇、蜱中分离出能引起多种野生动物和家畜感染（羊、马、狗、猫、鸟、鱼等）正常人粪便带菌率达10%左右，70%的人可短期带菌。新生儿、免疫功能降低者，易受该菌感染健康带菌者是主要的传染源污染食物，粪-口途径传播，通过肠道扩散全身胎盘和产道——感染新生儿接触病畜及产品