微生物检验操作规程

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1、微生物检验操作规程1.目的建立微生物检验标准操作规程，保证检验操作规范化。2.范围适用于本公司相关的微生物检验活动的全过程。3.职责3.1微生物检验员负责微生物检验的全过程；3.2QC主管负责监督检查本规程的有效实施。4.操作规程4.1微生物检验玻璃器皿吸管的洗涤4.1.1一般的玻璃器皿（例如培养皿、试管、三角瓶等），可用毛刷及洗涤剂洗去灰尘、油垢，然后用自来水、蒸馏水充分冲洗，直至玻璃器皿内壁均匀分布一层薄的水膜，即器壁既不挂水珠也无条纹，即洗涤达到标准。4.1.2玻璃器皿内有污迹不能洗净时，可浸泡于洗液中，待器皿中有机

2、物氧化分解后，取出用自来水、蒸馏水冲洗干净，备用。4.1.3新购的玻璃器皿先用2％盐酸浸泡，再用用自来水、蒸馏水充分冲洗。4.2器皿的包扎4.2.1试管：塞上胶塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。做发酵试验时，将试管头塞上专用的耐高温PVC试管帽。4.2.2三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口塞上胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。4.2.3吸管：将耐高温的移液枪头装盒，用用牛皮纸或报纸包裹。4.2.4平皿：10个为一组，用牛皮纸包裹。4.3消毒和灭菌：4.3.1化学灭菌：此法适用于微生物操作过程中不能加热、紫外线的地方

3、。如人手等。（1）用75%的乙醇溶液或0.1%新洁尔灭擦拭或浸泡。（2）一般用1～2%的甲醛液浸泡软管和用具。（3）一般成品漂白粉的有效成分是25～32%。使用时配成有效成份的2%溶液洒在地面或容器内，（对金属有腐蚀作用）放置10～15min后冲洗即可。（4）氯灭菌剂的能力以有效氯表示，将氯水配制成50～100PPm的有效氯溶液，可用于浸泡，冲洗和表面杀菌。但氯对金属有腐蚀作用。4.3.2物理灭菌：4.3.2.1干热灭菌：适用于干燥的玻璃器皿（吸管、平皿等）、金属器具（镊子等）、固体试液、液状石蜡等。灭菌条件一般选用在16

4、0℃干热空气灭菌2h。（1）器具用牛皮纸或灭菌袋包（装）扎，放入金属容器内。（2）器具在干燥箱加热前放入，每个器具之间留有足够的空隙，使热空气能畅通。（3）关闭箱门接通电源，打开通气孔，使箱内湿空气能逸出，至箱内温度达到100℃时关闭。（4）加热至160℃，保持2小时。（5）切断电源，冷却至60℃时，打开箱门，取出灭菌器具，并打开箱顶通气口。注：灭菌时必须注意温度不能超过180℃，以免使棉花、报纸烘焦；灭菌时不得打开箱门；干燥箱未冷却时，不要取出里面器具，防止内外温差过大造成玻璃器具爆炸璃器具爆炸。4.3.2.2湿热灭菌：

5、适用于容器、培养基、无菌衣、胶塞以及其他遇高温和潮湿不发生变化或损伤的物品。详见《压力蒸汽灭菌器操作规程》。（1）装入培养基的瓶用胶塞盖上，再用牛皮纸包扎。（2）瓶中的培养液不要超过1L，否则灭菌不彻底。（3）容器的上部应留有足够的空间（一般不超过装量的2/3），以便产生气泡。（4）器具用牛皮纸包裹。（5）器具的组合和包裹应允许灭菌蒸汽接触所用物品。（6）各类器具装入灭菌器时，相互间要留有空隙以使蒸汽自由流动。4.4无菌操作的准备工作及注意事项4.4.1微生物室应定期按《微生物实验室管理规程》清洁。4.4.2微生物室使用前

6、，应先打开紫外灯灭菌20～30min。4.4.3微生物室应备有专用剪刀、镊子、接种针，每次使用前后应灭菌消毒。4.4.4微生物室应备有75%酒精棉球；新洁尔灭消毒液内浸纱布数块，备用。4.4.5进入微生物，换专用鞋，穿好洁净服，离室时脱去洁净服和专用鞋，洁净服和专用鞋只准在微生物室内使用，不准穿到其它地方去，并定期洗换和消毒灭菌。4.4.6样品检验前应在原始记录本上记录名称、批号等内容，并在所用平皿或试管上详细记录样品序号、检验日期等内容。4.4.7无菌操作前，用75%的酒精棉球擦手。4.4.8操作要正确迅速，所用的器皿均

7、应是经过严格灭菌的器皿。4.4.9检验完毕，立即清理工作台，弃去不需要物品，打开紫外灯灭菌20～30min。4.5微生物检验用培养基、溶液的配制、使用与储存配制方法参见培养基说明书或检验标准项下规定配制。4.5.1水：电导率在25℃时不超过25μs/cm，除非另有规定要求。4.5.2称重和溶解：保存培养基的时间需视培养基中水份蒸发的程度及有无污染而定，已制备好的培养基要保存于冰箱中。在冰箱中存放的培养基在使用前要先置于室温30min，使其与室温一致再使用，因为气体的溶解度可因温度上升而降低，特别是乳糖胆盐发酵管内的倒管会因

8、温度上升而出现气泡，这一点必须注意。4.5.3pH的测定和调整：用pH计测pH，必要时在灭菌前进行调整，除特殊说明外，培养基灭菌后冷却至25℃时，pH应在标准pH±0.2范围内。一般使用浓度约为40g/L（约1mol/L）的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L（约1mol/L）的盐酸溶液调整培养基的pH