（县医院）临床微生物检验标准操作规程

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1、目录第一部分标本处理与细菌学检验1血液、骨髓标本的细菌检验42尿液标本细菌检验73粪便标本的细菌检验104痰及上呼吸道标本的细菌检验145脑脊髓液标本的细菌检验196胆汁标本的细菌检验237穿刺液标本的细菌检验168生殖系统标本的细菌检验299脓液标本的细菌检验3210K-B纸片琼脂扩散法3711临床微生物实验室常规药敏试验的抗菌药物分组4012药敏试剂的质控标准操作程序4213细菌常用试剂及培养基的配制4414肥达氏反应49第二部分仪器1离心机的维护与保养512显微镜的维护与保养533生物安全柜使用操

2、作程序及注意事项54第一部分标本处理与细菌学检验1血液、骨髓标本的细菌检验标准操作程序(SOP)【目的】：确保血液、骨髓标本细菌检验结果的准确性。【适用范围】：临床微生物检验【支持性文件】：全国临床检验操作规程【操作步骤】：增菌培养基培养基：使用自制血培养增菌培养瓶二、标本的采集：1、采血时机：在患者发热期间越早越好，以正在发冷发热时或发冷发热前半小时为宜;抗生素治疗前;或在下一次抗生素治疗前立即采集标本。2.采血量：成人一般为10ml,新生儿与婴幼儿为l-2mb儿童3・5ml。三、标本的处理、鉴定与报

3、告：1、按无菌程序釆集血液接种相应培养瓶内立即送往细菌室。2、收到已接种标本的血培养瓶后，将血培养瓶放入孵育箱相应的位置进行孵育。3每天观察培养瓶生长情况，有浑浊出现应接种平板4•取出血培养阳性瓶，无菌抽取培养液转种血琼脂平板和巧克力平板置系统外35°C孵育。并作涂片、革兰染色镜检和药敏试验。将镜检结果报告临床医生，作为第一级报告。7、小时将将初步的药敏结果报告临床医生，作为第二级报告。8、当转种的血琼脂平板或巧克力平板上岀现单个菌落时，立即取单个菌落进一步作鉴定和药敏试验。将最终确定的结果报告临床医生

4、，作为第三级报告。如果血琼脂平板或巧克力平板上出现两种细菌时，应分别进行鉴定和药敏实验。O严养O——初步印象35°C48-72h厌氧生长35°C24-48h需氧无生长一快氧培养XX菌生长生化鉴定」药敏试验—按兼鬻菌鉴定1、在预置5天培养时间内无细菌生长的培养瓶，应作盲目传种1次,无细菌生长方可报告阴性。【参考文献】：中华人民共和国全国医政司编•全国临床检验操作规程（第二版）南京：东南人学出版社1997.454刘运德编：微生物检验（第二版）北京：人民卫生出版社2002.122编写审核人批准人起效tl期吴茂

5、彬2005.92尿液标本的细菌检验标准操作程序(SOP)【目的】：确保尿液标本细菌检验结果的准确性。【适用范临床微生物检验【支持性文件】：全国临床检验操作规程【操作步骤】：标本的采集要求：由护士或医生指导患者留取标本I.清洁中段尿：女性患者以肥皂水或1：1000高猛酸钾溶液冲洗外阴及尿道口；男性患者应翻转包皮冲洗，用肥皂水冲洗尿道口，然后排尿弃去前段尿，留取中段尿10ml左右于无菌容器内，立即加盖送检。2•肾盂尿：有外科医生采集2.膀胱穿刺尿：有外科医生采集3.应在用药前采集标本。4.通常取晨起第一次尿

6、液5.应用灭菌的容器盛标本。6.尿中不能含有防腐剂或消毒剂7.标本采集后lh内送检。各种培养目的操作步骤1.一般细菌培养：采用定量培养法各取1环尿液分别接种血琼脂平板，置35°C孵箱培养18-24小时观察结果，如果有细菌生长，取菌落涂片革兰染色，根据菌落特征和菌体形态、染色性质，根据全国检验操作规程进行鉴定和药敏试验。2.厌氧菌培养：取膀胱穿刺尿离心，用尿沉渣直接接种血平板和厌氧血平板分别作需氧和厌氧培养2-4天观察结果，如果需氧培养无细菌生长，厌氧培养有菌生长，可进一步按厌氧菌鉴定方法进行鉴定。3.淋

7、病奈瑟菌培养：接到标本后立即离心，取沉淀物接种已预温35°C的GC巧克力琼脂平板上，置35°C5-10%C02环境中培养24小时，若无细菌生长则培养至48小时，若有可疑菌落，按淋病奈瑟菌进行鉴定。1.假丝酵母菌培养：采用定量培养法取尿液接种沙保罗琼脂平板、，置35°C孵箱培养（深部致病真菌一般都适于35°C培养）每天观察结果1次，如果有菌生长，取菌落涂片革兰染色，按真菌鉴定方法进行鉴定。2.L菌培养：先将标本通过0.45um滤膜滤菌处理后，取滤液1.5-2ml接种于高渗增菌液内，35°C孵箱培养，逐日观

8、察有无细菌生长，有菌生长时，用棉拭子沾取菌液点种于L平板上，然后以接种环做放射状划线，35°C孵箱培养1-7天，逐日观察菌落生长情况。【结果报告】:1•培养48小吋无细菌生长，报告“无细菌生长”。2.细菌数＜104CFU/ml报告菌名，与临床医生联系后决定是否做药敏试验。3•查见有意义的细菌，完成鉴定并报告菌名及其菌落计数（cfu/ml）及药敏结果。【临床意义】：1・诊断泌尿系统感染的细菌学标准：革兰阳性菌、真菌菌落计数21万cfu/ml,