培养基的配置

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1、实验一培养基的配制1、了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基的配制原理。2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。3、掌握压力蒸汽灭菌方法的原理和方法步骤。实验目的培养基(culturemedium)是指人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生积累代谢产物的营养基质。自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适。为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基合适的pH。实验原理培养基按成

2、分可分为天然培养基（如麦芽汁培养基）、合成培养基（如高氏一号培养基、察氏培养基）和半合成培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯葡萄糖培养基）。按物理状态可分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%。培养基还可按用途划分，通常分为基本培养基、富集培养基、选择培养基、鉴别培养基等。实验原理(continued)牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁培养基等都是常用的培养基。牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；高氏一号培

3、养基用于培养放线菌；麦芽汁培养基和豆芽汁培养基通常用于酵母菌的培养；马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。实验原理(continued)实验分组安排L1：牛肉膏蛋白胨培养基的配制500ml斜面20支，余装三角瓶L2：高氏一号培养基500ml斜面20支，余装三角瓶R1：马铃薯葡萄糖培养基500ml斜面20支，余装三角瓶R2：豆芽汁培养基500ml斜面20支，余装三角瓶牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g琼脂15-20g水1000mlpH7.4-7.6高氏一号培养基配方：可溶性淀粉20gNaCl0.5gKNO31g1gK2

4、HPO4·3H2O0.5gMgSO4·7H2O0.5gFeSO4·7H2O0.01g琼脂15-20g水1000mlpH7.4-7.6马铃薯培养基配方：马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15-20g水1000mlpH自然配法：马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后纱布过滤取汁，再加入糖和琼脂，溶化后补足水分。豆芽汁培养基配方：黄豆芽100g蔗糖（或葡萄糖）50g琼脂15-20g水1000mlpH自然配法：豆芽加水煮沸半小时，然后过滤取汁，再加入糖和琼脂，溶化后补足水分。1、称量及溶化2、调pH3、加琼脂、溶化、定容、（过滤）4、分装、加塞、包扎5、

5、灭菌6、摆斜面操作步骤称量与溶化：注意：1）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛肉膏，抹于称量纸上，勿取过量，不足时，再蘸取少量，逐步添加；然后将牛肉膏连同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。2）可溶性淀粉应先用少量冷水调成稀糊状，再加入量杯的热水中。操作步骤(continued)加琼脂、溶化、定容、（过滤）琼脂一般应在调好了pH后加入，琼脂的加入不会影响培养基的pH。琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过软，另外部分则琼脂过多。加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减

6、小，应补充水分至所需量。可趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察；如无特殊要求，通常可省略该步。操作步骤(continued)分装：1）装量：液体——试管高度的1/4左右固体——试管高度的1/5，灭菌后摆斜面半固体——一般为试管高度的1/3，灭菌后垂直放置操作步骤(continued)分装：2）分装装置：操作步骤(continued)3）注意：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染；若不慎沾在了管口，可用湿纱布揩净。分装：操作步骤(continued)加塞：棉塞或硅胶塞作用：防止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证

7、有良好的通气性能。操作步骤(continued)操作步骤(continued)棉塞制作方法：操作步骤(continued)A—配制时纱布塞法B—灭菌时包牛皮纸C—培养时纱布翻出操作步骤(continued)包扎：◇加塞后，试管通常每7支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。◇以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。◇用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。操作步骤(continued)灭菌：◇培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌◇通常灭菌条件为1.05kg/cm2,121.3℃灭菌20分钟；含糖量高的培养基，如马丁

8、氏培养基则为0.56kg/cm2,112.6℃灭菌30分钟。◇操作步骤详见下一课件操作步骤(continued)摆斜面：◇