[精品]培养基的配置.doc

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1、培养基的配置1、学生用活动器材：材料：牛肉膏、蛋白月东、琼脂、氯化钠、NaOH.清水用具：天平、牛角勺、量筒、滴管、玻璃棒、250ml烧杯、50ml烧杯、三角架、石棉网、酒精灯、火柴、PH试纸、锥形瓶、平板培养1111、试管、棉塞、线绳、报纸、电炉子、高压灭菌锅2、牛肉膏蛋白腺培养基配方牛肉膏0.3g蛋白豚lgNaCL0.5g琼脂2gpH7.0〜7.5水100ml3、配制培养基的过稈称量〜溶化一调节pH值一过滤一分装一塞棉塞和包扎一灭菌。%1称量：按照培养基配方，准确称取各成分放入大烧杯屮。技能："•天平的使用：左物右码b-•般

2、药品的称量：各垫一张大小相同的纸c.腐蚀性、粘稠药品的称帚：川烧杯等玻璃器皿称最，先称空容器的质最培养”名称配蜀H期操作祈姓名%1溶化：将培养基各种成分按配方称量好后，分别放入烧杯中，加入100ml水，在酒精灯上加热搅拌至完全溶化后再放琼脂。技能：久搅拌：玻璃棒按一个方向顺序搅拌，不能碰触烧杯内壁。b.有些原料不易溶解，如牛肉膏等，可先在小烧杯屮加水少许，加热溶解后倒入大烧杯屮，但总水量要控制在lOOmUc.琼脂的溶化：其余成分全部溶化后再放琼脂。在琼脂溶化过稈中要不断搅拌，并控制火力，防止培养基溢出或烧焦。d.培养基完全溶化后

3、要补足水分。%1调酸碱度（pH值）：先用pH试纸进行测量。如果偏酸或偏碱，可用10%HCI和10%NaOH调整pH值至所需范围。技能：a.PH值的测定：用洁净干燥的玻璃棒醮取少最，在试纸一端点一下既可。b.调PH值时，要逐滴滴入NaOH溶液，边滴边搅拌，并随时用PH试纸测量。%1过滤：培养基屮如有些成分没完全溶解，常需过滤。常用滤纸、纱布（叠成6层）或纱布间加脱脂棉花过滤。加琼脂的培养基要趁热过滤。%1分装：固体培养基都要趁热分装，齐容器的量如下：锥形瓶：一般不超过1/2；试管：一般装管高的1/5或1/4；倒平板一般是用时再倒。

4、技能：分装时应避免培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞而引起污染。%1塞棉塞和包扎：分装后试管口及瓶口祁要塞好棉塞。做棉塞用普通棉花，其形状、大小、松紧与管口和瓶口要吻合，棉塞1/3露于管外，2/3塞进管内。棉塞的制作和塞入的正确方法见图4・7。棉塞塞好后，外包厚纸（牛皮纸一层或用I口报纸二层），用绳捆扎。包扎的作用是避免灭菌时冷凝水淋湿棉塞，并防止接种前培养基的水分散失或污染杂菌。5卷成6扌®?^7@4-7傩的做法%1灭菌：经过分装、包扎的培养基应立即进行灭菌。一般采用高压蒸汽灭菌时，在15磅/英寸2蒸汽压、121°C温度下，3

5、0分钟即可达到杀丝细菌芽抱的目的。技能：a.打开灭菌锅盖，向锅内加入适量水。b.将制备好的培养基和需要火菌的其它用品，一起放入高压火菌锅中（装有培养基和水的注意要立着放稳）。不要放得太挤，以免影响蒸汽流通。c.盖好锅盖，采用对角形式均匀拧紧盖上的螺旋，使锅密闭。打开放气阀，开始加热。①紧固螺栓安全阀压力表排气阀④盖排气软管灭菌桶①底架②d.当锅内产生蒸汽后，放气阀开始有热气排出，自开始产生热气后约3分钟（锅内冷空气已排尽），再关闭放气阀。此时锅内温度随蒸汽压力增高而上升。待压力上升到15磅/英寸2,温度达到120~121°C时,

6、要控制小火，恒温20〜30分钟,此时必须注意勿使压力继续上升或下降。e.停止加热，待压力下降至零时，打开放气阀，排出残留蒸汽，打开锅盖，取岀灭菌物品。注意：火菌过程屮，一定注意排净锅内的冷空气，冷空气排不净时，锅内温度达不到火菌温度，会影响火菌效果；操作时，必须严格按操作规稈操作，否则容易发生意外事故，应在教师指导下操作。%1倒平板和摆斜面：制作斜面培养基和平板培养基须趁培养基未凝固时进行。4、制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5・1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜曲培

7、养基。5、制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养川1•盖，右手迅速将培养基倒入培养川1•屮，毎皿约倒入1()毫升，以铺满川L底为度。铺放培养基后放置1.5分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养1111一叠；倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基未长杂菌，即可用来培养微生物。