实验一 培养基的配置

《实验一 培养基的配置》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验一培养基的制备一、实验目的1.了解并掌握培养基的配制原理及配制步骤；2.掌握高压蒸汽灭菌的原理及操作方法；3．学习培养基分装、棉塞制作及试管包扎等基本操作技术。二、实验原理培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。根据培养基制成后的物理状态不同，可以分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基（加入1.5%-2.0%的琼脂）；按照组成培养基的营养物质来源不同，可以分为天然培养基、半合成培养基

2、和合成培养基。马铃薯蔗糖琼脂培养基是一种半合成培养基，可用于培养各种真菌（微酸性）；牛肉膏蛋白胨培养基常用于培养细菌，为天然培养基（细菌：中性或偏碱性）。任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭绝，以备纯培养勇。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌（高压蒸汽锅，0.1MPa，121.1℃，15-30min）。尽管培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。三、实验材料刻度搪瓷

3、杯（1000ml，A组1个、B组2个）、天平、分装漏斗、分装架、试管、试管架、玻璃棒、普通棉花、白线绳、牛皮纸、纱布、电炉子、高压灭菌锅A组：水果刀、蔗糖、马铃薯、琼脂B组：小烧杯、pH试纸、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、5%NaOH溶液配方一、马铃薯蔗糖琼脂培养基马铃薯（去皮）200g、蔗糖20g、自来水1000ml、琼脂18-20g、pH自然配方二、牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏（5g）、蛋白胨（10g）、NaCl（5g）、自来水1000ml、琼脂18-20g、pH7.2-7.4四、操作步骤每组500ml1、马铃薯蔗糖琼脂培养基1

4、）将土豆去皮，切成1cm见方的小块，称取100g放入搪瓷杯中，再加500ml自来水，置电炉上煮至土豆块一捏就碎即可，然后用4层纱布过滤，滤液直接3过滤到另一个搪瓷杯中。2）在滤液中加入称好的琼脂（9-10g）、蔗糖（10g），边加热边搅拌（目的：防止琼脂沉淀在杯底烧焦，并应控制火力，以免培养基暴沸而溢出容器），至琼脂完全溶解，补足水量至500ml。3）趁热用分装漏斗分装于试管中（试管1/4-1/5左右，分装时注意不要使培养基沾在试管口，以免浸湿棉塞，引起污染。）。塞好棉塞，用牛皮纸将5-6支试管包好，用白线绳扎紧，并在包装纸上标明

5、培养基名称，制备班级、组别和日期等。4）高压蒸汽灭菌器中121℃灭菌30min，取出趁热摆斜面（斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜）。5）保温试验：灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养，经24-28h培养无菌生长，可保存备用。2、牛肉膏蛋白胨培养基1）用小烧杯称取牛肉膏2.5g，加入少量自来水，置电炉上搅拌加热至完全溶解。2）将溶解的牛肉膏洗入带刻度的搪瓷杯中，并用自来水洗2-3次，加入蛋白胨（5g）、NaCl（2.5g）、琼脂（9-10g），置电炉上边加热边搅拌，直至琼脂完全熔化，补足水量至500ml。3）调pH用NaOH

6、或HCl调至pH7.2-7.4。4）趁热用分装漏斗分装于试管中。塞好棉塞，用牛皮纸将5-6支试管包好，用白线绳扎紧，并在包装纸上标明培养基名称，制备班级、组别和日期等。4）高压蒸汽灭菌器中121℃灭菌30min，取出趁热摆斜面。5）保温试验：37℃恒温箱内培养24-28h。五、结果与分析1．记录培养基灭菌成功与否（培养基表面有无颗粒状物质、有无裂口、底部有无收缩现象、有无水珠流动）2．试述高压蒸汽灭菌的原理与操作方法。高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力

7、的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到0.1MPa时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。1.加水打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。2.装锅、加盖3将灭菌物品放在内锅中，不要装得过满和紧靠锅壁，以免影响蒸汽流通和冷凝水顺壁流入灭菌物品。盖好锅盖，按对称法旋紧四周固定螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。3.排气打开排气阀。插上电源加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当

8、有大量蒸汽排出时，计时，维持5min，以使锅内冷空气完全排净。然后关闭排气阀。4.保温、保压继续加热，压力开始上升，温度也随之上升。当温度达到121℃时开始计时，维持20-30min），温度不要超过126℃。然后切断电源，自动降温，待压力降至接近“