拟南芥培养基配置

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1、1.1播种和发芽拟南芥可在非无菌条件下，生长在土壤或人工配制的各种培养基中。作为栽植的容器，可根据各自条件置于花盆或格状分离的多穴塑料盘中。常用的混合物有泥炭藓、营养土、蛭石和珍珠岩等，例如珍珠岩：蛭石：泥炭藓=1:1:1的混合物，表土、堆肥或腐殖质土：珍珠岩或蛭石=1:1,1:2或2:1的混合物。如果用于营养研宄则可以蛭石类惰性物质作培养介质，施以配有营养物质的水溶液。栽培拟南芥的介质均要求有良好的排水性，因此一般混合砂子、蛭石等惰性介质，保持良好的排水，防止过湿引起真菌和昆虫幼虫滋生。播种前土

2、壤混合物进行高压灭菌处理30min,以杀死可能存在于混合物中的任何害虫。在把土壤混合物置于花盆或其他容器中后，将整个容器置于水或营养液中，靠毛细管作用浸湿介质，然后将处理洗净来的种子，用尖头烧融后的移液管小心移至土表，均匀播下。如果播种量较大，可用浓度为0.lg/100mL琼脂或砂子事先均匀混合后播种。种子发芽期间必须保持高湿度，故容器可用塑料膜复盖，保持一周左右方可揭去。[1]将播有种子的容器移至低温或相应低温条件下，在2〜4°C下放置2〜4d，从而于吸胀条件下破除种子休眠，这对新鲜收获的拟南芥

3、种子尤为必要。对大多数拟南芥品系来说其种子是中度休眠的，收获已久的这类生态型的拟南芥种子可免于低温处理，而有些生态型甚至需长达7d的低温处理。干种子的低温处理往往是无效的。低温处理后，将盆移至温室或生长室，在22°C左右发芽，夜温可比H温低2°C,用20001x的荧光灯给予光照，光周期为18h光/6h暗(也可2仙光照[2])，在5d左右可见拟南芥发芽。拟南芥发芽需光，故防止种子被土覆盖。1.2生长发育条件的控制[3]拟南芥一般是冬性一年生植物，自然条件下种子在秋天发芽，幼年期度过冬天，花分生组织在

4、春季分化，种子在夏季成熟脱落。大多数实验室栽植的拟南芥品种在发芽后4周开花，而在4〜6周后釆集种子。不同拟南芥生态型其发育进程快慢、开花时间早晚、何时成熟等除了取决于遗传性以外，也受外界环境条件的影响。1.2.1光光对拟南芥生讼的影响涉及光强和光周期两个方面。以光强度说，在生长室中一般最光的光强度为120〜150ymol/(m2•s)(1ymol/(m2•s)=5烛光=0.217W/m2=53.81x),这可通过荧光灯，配以白炽光来达到。在夏天温室中，60%荫影有助于光强控制和温度调节，高光强或直

5、接太阳光照射对较老植株可以忍受，而年幼植株避免强光。拟南芥在连续照光和长日下开花加快，短日时开花被阻遏或延迟，这表明拟南芥开花需要长日照光周期，一般至少12h的光照。在冬季温室中可补充早晚的光照，以满足光周期需要，一般给以16h光照，8h暗期为宜。连续光照可促进生殖循环，略微提早开花，但使叶数减少及降低种生成，而较短円照有利于营养生长。1.2.2温度温室和生长室的温度应予以控制，最适生长温度为25°C左右，稍低的温度也是允许的。当水分供应充足时，植物甚至能在高达34°C时生长，但会减少受精。较老的

6、植物能忍受高温，但保持25°C对整个生长周期是有利的。当种子形成时，生长室温度宜设定在25°C，而温室温度宜在23°C，夜温可比闩温低2〜4°C为宜。［2］对于许多迟开花的拟南芥生态型来说，幼苗期要给以rc左右处理一个时期（如几周），以完成春化作用，从而在长H下促进开花。而对于常用的拟南芥生态型Landsbergerecta和Columbia则不需作春化处理就能开花。必须注意这里的低温春化处理是不同于播种时破除休眠的低温处理，破除休眠的低温处理乂称层积处理（stratification）。1.2.

7、3水分在种子发芽后的头几周里，理想的供水是来自毛细管由下至上的渗水，只有当土壤呈现干旱时适时灌溉。过量供水会引起土表藻类和真菌的生长。在拟南芥头两片真叶开始伸展之前必须避免干早，当真叶长出后，灌水频率可相应减少，如每周一或两次，而至长角果充实阶段必须保证水分供应，以利于种子形成。浇水时最好待90%左右的穴盘或花盆完全干燥之后进行。［2］不仅土壤供水状况影响到拟南芥的生讼发育，而且湿度也会影响水分供给。虽然湿度的增加（如50%〜60%）会大大减少土表干旱的影响以及发芽着的幼苗脱水危害，但一般说来拟南

8、芥植株，包括幼苗都能忍受低湿度，处在莲座状阶段的植株可在不同湿度下生长，当长角果进入成熟阶段时，较低湿度（如＜50%）是有利的。1.2.4营养正常情况下只要配置合适的土壤混合物，就并非必须供给营养物质，但是贫瘠的营养状况会降低植株高度，使它提早开花，并使种子着生减少。在生长发育的后期阶段补充营养物质将会增加种子着生，并产生较健壮的植株。当植株呈现出轻微淡绿色时，表明营养供给不足，则应立即施以营养物质，正常健壮的拟南芥植株是亮暗绿色的。1.2.5防止杂交拟南芥是自交授粉的，为了保持拟