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《GBT17494-1998 马传染性贫血病间接ELISA技术规程.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、GB/T17494-1998前言马传染性贫血病(简称马传贫，下同)的流行，曾给我国养马业造成巨大的经济损失。经过多年的防制，在全国范围内取得显著成效，已达到控制标准。为消灭马传贫，提供一个先进有效、特异敏感、反应快速、操作方便、易于推广的检测方法，是十分必要的。为此制定马传染性贫血病间接ELISA技术规程。马传贫间接ELISA技术自1983年建立以来，已在全国主要养马省区推广应用十余年之久，在马传贫防制工作中发挥了重要作用。特别是研制的试剂实现了标准化、商品化，并以低耗优质的产品质量，为该方法推广应用奠定了基础，在这方面我们已走在世界前列。本标准的附录A、
2、附录B,附录C都是标准的附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由中华人民共和国农业部畜牧兽医司归口。本标准由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所负责起草。本标准起草人:戴玉坤。.www.bzxzk.com.中华人民共和国国家标准马传染性贫血病间接ELISA技术规程GB/'f17494-1998RulesofindirectELISAtechniqueforequineinfectiousanemiadisease1范围本标准规定了马传染性贫血病间接ELISA技术规程的测定原理、仪器设备、试剂、配制溶液、操作步骤、结果判定。本标准适用于检测马血清中的马传贫
3、疫毒抗体。可用于生产和经营马匹者对未注射马传贫疫苗马匹的检疫，马传贫病马的定性;也可用于对注射马传贫疫苗马匹的免疫状态进行测定。2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。NY127-1987马传贫酶联免疫吸附试验(ELISA间接法)抗原、酶标记抗体制造及检验试行规程3测定原理用特制的马传贫病毒抗原(NY127)，包被聚苯乙烯微量板孔，使免疫反应在固相载体上进行。当被检血清中有马传贫病毒抗体存在时，则与孔壁上的抗原形成抗原一抗
4、体复合物，再与酶标记的抗体(抗马免疫球蛋白)反应，最后通过测定酶作用底物催化后的产物，进行定性、定量抗体测定。4仪器设备吸管:1mL,5mL,10mL;量桶:50mL,100mL,1000mL;烧杯:50mL,100mL;玻璃滴管:每滴体积约20^-30pL;血清稀释板:2。孔板每孔容积为1mL;定量加液器:1mL分装定量;微量吸液器:50pL,100pL;分析天平:感量。.001g;托盘夭平:感量。.01g;水浴锅;酶标测试仪。5试荆除特别注明外，所用试剂皆为分析纯。国家质f技术监督局1998一08一31批准1999一01一01实施.www.bzxzk.
5、com.GB/'r17494-1998磷酸氢二钠;磷酸二氢钠;氯化钠;柠檬酸;磷苯二胺(化学纯);过氧化氢(浓度30%);吐温-20(Tween-20);白明胶(Gelatinwhite)(E.Merck);健康牛血清(无污染);浓硫酸(纯度95%-98%);酶标记抗体(冻干品，活性和特异性应符合NY127，见附录A);马传贫病毒抗原包被板(活性和特异性应符合NY127，见附录B);阴性及阳性对照血清(冻干品，活性和特异应符合NY127).6配制溶液6.1磷酸盐缓冲液(0.02mol/LpH7.2PBS)6.1.10.2mol/L磷酸氢二钠溶液:称取磷酸氢
6、二钠(NaiHPO,·12HzO)71.64g，先加适量的去离子水加热溶解，最后定容至1000mL,混匀。6.1.20.2mol/L磷酸二氢钠溶液:称取磷酸二氢钠(NaH,PO,"2H,O)31.21g，先加适量的去离子水加热溶解，最后定容至1000mL,混匀。6.1.3量取。.2mol/L磷酸氢二钠溶液360mL,0.2mol/L磷酸二氢钠溶液140mL,称取氯化钠38g，混在一起，用去离子水溶解稀至5000ml-,6.2洗液(0.02mol/LpH7.2PBS-0.05%吐9-20)量取0.02mol/LpH7.2PBS1000mL，加入0.5mL吐温
7、-20,混匀。6.3血清及酶标记抗体稀释液(0.02mol/LpH7.2PBS-0.05%吐温-20-0.1%白明胶-10%健康牛血清)量取洗液(6.2)100mL，加入100mg白明胶加热溶解，冷却后量取90mL，加人健康牛血清10mL,混匀。6.4底物溶液(pH5.0磷酸盐一柠檬酸缓冲液，内含。.04%邻苯二胺及0.045%过氧化氢)6.4.1pH5.0磷酸盐一柠檬酸缓冲液:称取柠檬酸(CsHsO,·H20)21.01g，用去离子水溶解，定容至1000mL。量取243mL与。.2mol/L磷酸氢二钠溶液(6.1.1)257mL混合，于4℃冰箱中保存不超
8、过一周。6.4.2称取40mg邻苯二胺，溶于100mLpH5.0磷
