细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(PI法)

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1、北京雷根生物技术有限公司细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(PI法)产品简介：Leagene细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(CellCycleandApoptosisAnalysisKit)是一种采用经典的碘化丙啶染色(PIstaining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)是一种可以嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中与直接和的荧光染料，无碱基特异性。碘化丙啶与双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被PropidiumIodide染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的

2、分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNAfragmentation)导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。细胞凋亡时，流式细胞检测可呈现亚二倍体核型的特征，根据光散射的特点，PI染色可以区分细胞凋亡和细胞坏死的细胞峰型。细胞凋亡时，出现凋亡细胞皱缩、

3、染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的前向光散射低于正常。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。细胞坏死时细胞多表现为细胞肿胀，因此前向光散射高于正常，对侧向光散射高于正常。LeageneCellCycleandApoptosisAnalysisKit经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测，亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。该试剂盒检测细胞含量范围一般为0.1～1×106之间。产品组成：编号DA0030DA0030Storage名称50T100T试剂(A):PIStainBuffe

4、r25ml50ml-20℃试剂(B):PIStain(20×)1.5ml2×1.5ml-20℃避光试剂(C):RNaseASolution(50×)0.5ml1ml-20℃使用说明书1份主要成分：北京雷根生物技术有限公司试剂(A):主要由PI染色缓冲液等组成。试剂(B):主要由PropidiumIodide等组成。试剂(C):主要由RNaseA等组成。自备材料：1、流式细胞仪2、PBS3、预冷固定液：预冷的70%乙醇或4%多聚甲醛操作步骤（仅供参考）：1、细胞样品的制备：⑴贴壁细胞：①
小心收集细胞培养液到一个无菌离心管内备用。②
用胰蛋白酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时

5、，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。③
收集上述细胞悬液到离心管内。④
4℃，1000g离心3～5min，使细胞沉到管底。小心吸取上清并丢弃，可留大约50ul培养液，以免吸走细胞。⑤
加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。⑥
4℃，1000g离心3～5min，使细胞沉到管底。⑦
小心吸取上清并丢弃，可留大约50ulPBS，以免吸走细胞。⑧
轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。⑵悬浮细胞：①
4℃，1000g离心3～5min，使细胞沉到管底。②
小心吸取上清并丢弃，可留大约50ul培养液，以免吸走细胞。③
加入约1ml提前

6、预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。④
4℃，1000g离心3～5min，使细胞沉到管底。⑤
小心吸取上清并丢弃，可留大约50ulPBS，以免吸走细胞。⑥
轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。2、细胞的固定：加入1ml冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2小时或更长时间。4℃固定12～24小时可能效果更佳。3、细胞的清洗：①
4℃，1000g离心3～5min，使细胞沉到管底。②
小心吸取上清并丢弃，可留大约50ul溶液，以免吸走细胞。③
加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。北京雷根生物技术有限公司④
4℃，1000g

7、离心3～5min，使细胞沉到管底。⑤
小心吸取上清并丢弃，可留大约50ulPBS，以免吸走细胞。⑥
轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。4、PI染色：⑴一步法：①
PI染色工作液的配制：根据待检样品的数量，取适量试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)混合形成PI染色工作液。配制好的PI染色工作液4℃避光保存待用，24h有效。1个样品10个样品试剂(A):PIStainBuffer500ul5ml试剂(B