《基因工程制药复习》ppt课件

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1、简答题（1）如何克隆微生物的纤溶酶基因？（2）获得目的基因的途径有哪些？（3）限制性内切酶的特点（掌握如何从给出的序列中寻找酶切位点）。（4）PCR的类型及其应用（举例介绍）。（5）电泳上样缓冲液的作用有哪些？（6）如何估算引物的Tm值？（7）基因文库的特点是什么？（8）药物蛋白分离纯化的技术要求有哪些？（9）包涵体及其形成的原因是什么？名词解释杂交；探针；粘粒；同尾酶（同裂酶）;cDNA文库；基因工程药物；盐析；星活性;什么是基因工程？基因工程（geneticengineering）：又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生

2、物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。教学内容I基因工程制药概论(2学时）II基因工程制药原理及技术（25学时）1)基因工程概论（2学时）2)基因工程的基本技术（6学时）3)基因工程的工具酶和载体（6学时）4)目的基因的获取方法（4学时）5)目的基因的表达系统（3学时）6)基因工程菌株的发酵（2学时）7)药物蛋白的分离纯化与质量控制（2学时）III基因工程药物实例介绍（3学时）IV练习与复习（2学时）基因工程药物（Geneticengi

3、neeringdrugs）指利用基因工程技术研制和生产的药物，主要包括重组蛋白(多肽)药物、反义核酸药物、DNA药物和基因工程抗体等。重组人生长激素重组人白细胞介素重组人干扰素重组人胰岛素一、基因工程药物及其重要性1、定义2、种类：激素类及神经递质类药物细胞因子类药物酶类药物与凝血因子基因工程疫苗c)酶类药物与凝血因子酶类药物有些酶类对人体疾病有特异性治疗价值,其中最被重视的是能预防和治疗急性心肌梗死等血栓性疾病的链激（SK）,尿激酶(UK),及组织纤溶酶原激活剂(t-PA)。凝血因子甲型血友病是缺乏Ⅷ因子所致,乙型血友病是缺乏Ⅸ因子所致,在血友病发病率

4、中甲型占80%。以往治疗血友病用凝血因子是从血液中提取的,血友病人有遭受病毒等病毒感染的危险、用重组技术来生产凝血因子将克服血源性产品的缺点。d)基因工程疫苗基因缺失活疫苗（减法疫苗）目前这类疫苗中研究最多的是病毒疫苗，如流感病毒。伪狂犬病毒、单纯孢疹病毒（HSV）等。基因工程活载体疫苗（加法疫苗）通过表达外源保护性抗原基因，提供免疫保护。确定对某种疾病有预防和治疗作用的蛋白质；获得该蛋白质对应的基因；将该基因放入可以大量生产的受体细胞中（细菌、酵母菌、动物或动物细胞、植物或植物细胞）；利用受体细胞大规模生产这些蛋白质，即基因疫苗或药物。3、基因工程药物

5、制备的基本过程目的基因的克隆；构建DNA重组体；构建工程菌（或细胞）；目的基因表达；外源基因表达产物的分离分析；除菌、过滤；半成品/成品检定；包装。基本步骤●传统制药存在的问题：A、材料来源困难或制造技术问题而无法付诸应用；B、从动物脏器中提取出来，也因造价太高，或因来源困难而供不应求；C、由于免疫抗原等缘故，使它们在使用上受到限制。●基因工程技术的特点：能够十分方便有效地生产许多以往难以大量获取的生物活性物质，甚至可以创造出自然界中不存在的全新物质。4、基因工程制药的重要性治疗侏儒症的唯一方法，是向人体注射生长激素。而生长激素的获得很困难。以前，要获得

6、生长激素，需解剖尸体，从大脑的底部摘取垂体，并从中提取生长激素。现可利用基因工程方法，将人的生长激素基因导入大肠杆菌中，使其生产生长激素。人们从450L大肠杆菌培养液中提取的生长激素，相当于6万具尸体的全部产量。基因工程药品——生长激素二、基因工程药物发展历程DNA重组技术诞生——1972世界第一个基因工程药物的诞生：美国Lilly公司的重组胰岛素投放市场——19821996年，美国已拥有1300多家专门从事生物技术产品研究开发和生产的公司，70%从事生物医药开发；1、国外历程Genentech公司1976年，27岁的风险投资人RobertSwanson

7、与UniversityofCalifornia的教授HerbBoyer共饮了几杯啤酒，讨论了基因工程技术的商业前景。讨论结束时，他们决定建立一个公司，并取名为Genentech（GeneticEngineeringTechnology）。第一个基因工程公司在学术界和商业界的满腹怀疑中诞生了！Genentech的骄人业绩1976Genentech创立1977首次在微生物里生产了人蛋白生长激素抑制素1978克隆了人胰岛素基因1979克隆了人生长激素素基因1980公司上市，募集$35million1982第一个基因重组药（人胰岛素）上市（转让给Lilly公司）

8、1984第一个VIII因子，转让给CutterBiological1985第一个