《生化实验技术专题》ppt课件

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1、优秀精品课件文档资料生化实验技术专题主要内容和要求：以蛋白质分离纯化为例介绍生物大分子分离纯化的一般步骤和注意事项；介绍层析技术、电泳技术、离心技术的原理及其应用；总结蛋白质、核酸、酶、氨基酸测定的主要方法。——探生科技旗下Fantibody电子商务编辑部相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库

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3、超滤盐析（硫酸铵盐析）等点电沉淀有机溶剂沉淀透析│←前处理→│←粗分级→│←细分级→│材料选择与处理细胞破碎（机械破碎、溶账和自溶、酶解、化学处理）生物组织→无细胞提取液→粗产品→→结晶几种主要沉淀方法比较调整硫酸铵溶液饱和度计算表注意事项1．控制适当的pH2．控制低温3．注意提取过程中的溶液环境4．防止提纯过程中丟失一些辅助因子或亚基宇佐美曲霉537酸性蛋白酶的纯化纯化步骤总蛋白总活力比活力纯化倍数回收率（mg）（U）（U/mg蛋白）（%）1、粗酶液8043205411002、乙醇沉淀2935851232.27833、醋酸钙沉淀2129801412.64694、盐析

4、417714648.52415、丙酮沉淀11166110420.29276、结晶0.12130107219.703第二节几种重要的生物化学实验技术一、层析技术二、电泳技术三、离心技术一．层析技术（chromatography）1．层析技术一般原理2．层析技术分类及应用层析技术原理层析技术是一种物理的分离方法。无论何种层析，其系统通常由互不相溶的两个相组成：一是固定相（固体或吸附在固体上的液体），一是流动相（液体或气体）。层析时，利用混合物中各组分理化性质（如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、溶解度等）的差异，使各组分不同程度地分布在两相中，随着流动相从固定

5、相上流过，不同组分以不同速度移动而最终被分离。样品在层析时的移动速度可用迁移率Rf值表示：样品原点到斑点中心的距离Rf=——————————————样品原点到溶剂前沿的距离层析法分类（按装置分类）纸层析薄膜层析柱层析洗脱液样品填充物分部收集玻璃柱氨基酸分析仪图解缓冲液泵显色反应管茚三酮泵已分开的氨基酸离子交换柱样品注入口记录仪光电倍增管光源层析法分类及原理（按分离原理分类）吸附层析分配层析凝胶过滤（分子筛层析）离子交换层析亲和层析聚焦层析各类层析的原理和载体类别分离原理基质或载体吸附层析化学、物理吸附硅胶、氧化铝、羟基磷酸分配层析两溶剂相中的溶解效应纤维素、硅藻土、硅

6、胶凝胶层析分子筛效应的排阻效应sepharose、sephadex离子交换层析离子基团的交换反应离子交换树脂、纤维素、葡聚糖亲和层析分离物与配体之间有带配基的sepharose特殊亲和力或sephadex聚焦层析等电点和离子交换作用多缓冲交换剂（与带有多种电荷基团的配体相偶联的sepharose6B）吸附层析（absorptionchromatography）原理：以吸附剂作为固定相，选择适当的溶剂作流动相。由于各种物质的极性不同，被吸附剂吸附的程度和在流动相中的溶解度不同。层析时，当流动相从固定相上流过时，各组分也就不同程度地被溶解（解吸），然后又再被吸附、再溶解再

7、吸附，从而以不同速度随流动相向前移动。载体：硅胶氧化铝羟基磷石灰应用：分离纯化蛋白质、酶、氨基酸、核苷酸等生化物质分配层析原理：分配层析实际上是一种连续抽提方式。如纸层析中滤纸的结合水为固定相，以水饱和的有机溶剂为流动相（展开剂）。当流动相沿滤纸经过样品点时，样品点中的溶质在水和有机相中溶解度不同而不均匀地分配在两相中，各种组分按其各自的分配系数进行不断分配，从而使物质得到分离和纯化。载体：纤维素硅藻土硅胶应用：各种生化物质的分离鉴定分子筛层析（gel-filtrationchromatography）原理基质葡聚糖凝胶（sephadex）琼脂糖凝胶