仪器分析》第八章液相色谱分析

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1、液相色谱法了解液相色谱法的优点及适用范围理解常用检测器原理、优缺点及适用范围理解各种分离方式的原理、适用的分析对象及选择原则理解超临界流体色谱法的原理、优缺点及适用范围HPLC与GC的区别：GC流动相惰性，HPLC流动相与组分有作用HPLC一般在室温下进行、GC多在高温下进行应用范围－全部色谱分离对象的20％GC，HPLC约占80％HPLC更适合于制备1）液体的扩散系数比气体的小倍左右；2）液体粘度比气体约大100倍；3）液体表面张力比气体大104倍；4）液体密度约大1000倍；5）液体比气体不可压缩。1固定相和流动相（1）固定相按照承受压力来分：刚性固体－硅胶，耐高压，表面

2、可键合各种功能团硬胶－聚苯乙烯与二乙烯基苯交联而成，承压能力低，主要用于离子交换和尺寸排阻色谱按照孔隙深度来分：表面多孔型－实心玻璃外面覆盖一层多孔活性物质，如硅胶、氧化铝、离子交换剂和聚酰胺等，厚度1－2m，以形成无数向外开放的浅孔。全多孔微粒型－由直径为10-3数量级的硅胶微粒凝聚而成，颗粒细，孔浅，相对死体积小，出峰快，柱效高，但需要更高的操作压力。最大允许进样量比表面多孔型大5倍（2）流动相纯度高粘度低化学稳定性好沸点高于55ºC溶剂要完全浸润固定相与检测器匹配2高效液相色谱仪1）储液器；2）脱气器；3）高压泵；4）进样器；5）色谱柱；6）检测器。主要部件：储液器－

3、耐腐蚀、配2m镍合金过滤器脱气装置－氦气鼓泡来驱除溶在溶剂中的气体高压泵输送流动相，压力几Mpa至数十MPa。无脉动或者脉动很小流量稳定可调、耐腐蚀、密封性好恒压泵：压力恒定，泵腔体积大，流量随外界阻力改变而改变，逐渐被恒流泵取代气动放大泵恒流泵：流量恒定往复活塞泵、螺旋传动注射泵梯度洗脱装置类似于气相色谱中的程序升温两种、三种或者四种溶剂按照比例进行混合，进行二元、三元、四元梯度淋洗优点：改善峰形、提高柱效、分析时间减少；缺点：更换流动相达到平衡的时间需要更长常采用低压梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。或者：利用两台

4、高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。进样器高压进样阀－用微量注射器将样品注入样品环管（10L到2mL）色谱柱色谱系统的心脏优质不锈钢管，内壁光洁平滑接头死体积尽可能小为了保护色谱柱不被污染，有时候需要在分析柱前加一根短柱，称为卫柱。为了防止由于卫柱而过分增加压力，在卫柱中使用的颗粒大小约10－30m。柱体为直型不锈钢管，内径1～6mm，柱长5～40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。检测器紫外检测器70％应用，氘灯，适用于梯度淋洗对流动相速度变化不敏感溶剂选择时紫外检测器波长不能小于溶剂的紫外截至波长；紫外检测器的重要进

5、展：光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。荧光检测器－灵敏度比紫外高2个数量级高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；示差折光检测器通用型，灵敏度低，温度影响大，不能用于梯度淋洗；偏转式、反射式和干涉型三种；电化学检测器电导检测器、库仑检测器、伏安检测器以及安培检测器。电导检测器只用于离子色谱。安培型最常用，灵敏度高，选择性好。紫外吸收示差折光荧光安培类型选择性通用性选择性选择性线性范围2.4104104～103104最小检测量ng0.1~1102

6、～10310-3～10-20.01~1梯度淋洗能不能能不能流速敏感性不敏感不敏感不敏感敏感温度敏感性低敏感低敏感HPLC检测器性能比较3液-固色谱法（1）原理吸附能力大小与吸附剂比表面积、物理化学性质、组分分子结构、流动相性质有关。组分、溶剂竞争吸附活性中心分离非离子型、不溶于水的几何异构体非极性石油烃的组成分析、芳香异构体等（2）固定相常用的是表面多孔和全多孔微粒型硅胶、氧化铝等。一般采用5-10m全多孔微粒。（3）流动相极性大的组分选择极性强的流动相，极性小的选择极性弱的流动相。对于给定的吸附剂，溶剂强度用溶剂强度参数表示，即单位面积吸附剂表面的溶剂吸附能。越大

7、，溶剂极性越大。保留值主要取决于官能团类型和数目。各类物质的保留值顺序：饱和烃<烯烃<芳烃有机卤化物<硫化物<醚<硝基化合物<腈<酯醛酮<醇胺<酰胺<羧酸<磺酸4化学键合相色谱法（1）化学键合相硅胶表面的硅羟基，能与合适的化合物反应。1）消除或者掩盖了表面吸附活性点，使表面性质均匀，缓和不可逆吸附，提高峰对称性。2）耐溶剂冲洗，没有固定液流失。3）改变键合的有机分子的结构和官能团类型，能改变固定相的分离选择性。4）固定液稳定性高，配用高灵敏度检测器，可以降低最低检出量。键合反应类型：1.Si-O