高效液相色谱分析

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1、复习2021/6/25分离度R定义；为什么可用分离度R作为色谱柱的总分离效能指标？能否根据理论塔板数来判断分离的可能性？为什么？根据“相似相容”原理，色谱的流出规律？热导检测器适用范围与工作原理？色谱流出规律分离非极性物质，一般选用非极性固定液，各组分按沸点次序先后流出色谱柱，沸点低的先出峰，沸点高的后出峰。分离极性物质，选用极性固定液，各组分按极性顺序分离，极性小的先流出色谱柱，极性大的后流出色谱柱。分离非极性和极性混合物时，一般选用极性固定液，这时非极性组分先出峰。对于形成氢键的试样，如醇、酚、胺和水等，一般选用

2、极性或氢键型固定液，各组分按与固定液分子间形成氢键能力大小先后出峰。2021/6/252021/6/252021/6/25第三章高效液相色谱分析法一、高效液相色谱法特点CharacteristicofHPLC二、影响色谱峰扩展及分离的因素Thefactorsthatinfluencepeakexpansionandseprationhighperformanceliquidchromatograph§3-1概述2021/6/252021/6/252021/6/252021/6/25经典LC与HPLC比较2021/

3、6/25HPLC:采用高压输液泵，高效微粒固定相和高灵敏度检测器HPLC特点：高压、高速、高效、高灵敏度、样品回收方便2021/6/25GC与HPLC的比较2021/6/25与GC比较，HPLC的优点分析对象广气相色谱只限于分析气体和沸点较低的化合物；HPLC不受样品挥发性和热稳定性的限制，适用于高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质。原则上讲，几乎可以分析除永久气体外所有的有机和无机化合物。流动相对分离起作用气相色谱的流动相仅起运载作用，对组分不产生相互作用力；HPLC的流动相对组分产生相互作用力，相当于增加了一个控

4、制和改进分离条件的参数。经常在室温条件下操作气相色谱法一般在较高温度下进行2021/6/25缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。与GC相比，流动相差别GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性2021/6/252021/6/25影响色谱峰扩展及分离的因素基本概念及基础

5、理论同气相色谱：保留值、分配系数、分配比、分离度、选择性因子(分离因子)、塔板理论及速率理论。由于流动相的差别，对色谱过程必然产生影响。2021/6/25速率理论(与GC对比)GC:HPLC:2021/6/25速率理论(与GC对比)讨论：1）流动相流速对HPLC板高的影响(与GC对比)next2）涡流扩散项及其影响next2021/6/25速率理论(与GC对比)2021/6/25速率理论(与GC对比)3）传质阻抗项及其影响2021/6/25HPLC法中分离条件的选择1.固定相与装柱方法的选择：选粒径小的、分布均匀的球

6、形固定相（dp≤10μm）首选化学键合相，匀浆法装柱2.流动相及其流速的选择：选粘度小、低流速的流动相——甲醇，1ml/min3.柱温的选择：选室温250C左右2021/6/252021/6/25第三章高效液相色谱分析法一、液-液分配色谱liquid-liquidpartitionchromatograph二、液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromatograph三、离子交换色谱ion-exchangechromatograph五、离子对色谱ion-pairchromatograph

7、四、离子色谱ionchromatograph六、排阻色谱size-exclusionchromatograph§3-2主要分离类型与原理highperformanceliquidchromatographbasicprincipleandmainseparatingtypes2021/6/25一、液-液分配色谱liquid-liquidpartitionchromatography固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于

8、固定液的极性（正相normalphase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相reversephase）。正相与反相的出峰顺序相反；固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。2021/6/25二、液-固吸附色谱liquid-solid