《高效液相色谱分析》PPT课件

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1、第三章高效液相色谱分析高效液相色谱法：以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法一、HPLC与经典LC区别二、HPLC与GC差别三、高效液相色谱仪流程图四、特点及应用一、HPLC与经典LC区别主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段1．经典LC：仅做为一种分离手段柱内径1~3cm，固定相粒径>100μm且不均匀常压输送流动相柱效低（H↑，n↓）分析周期长无法在线检测2．HPLC：分离和分析柱内径2~6mm，固定相粒径<10μm（球形,均匀装柱）高压输送流动相柱效高（H↓，n↑）分析时间大大缩短可以在线检测二、HPLC与GC差别相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测主

2、要差别：分析对象的差别和流动相的差别1．分析对象GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制相对分子质量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%2．流动相差别GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液

3、体作为流动相可以增大分离选择性3．操作条件差别GC：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）提高柱内填料装填的均匀性,减小粒度三、高效液相色谱仪流程图1．贮液器（滤去颗粒状物质）2．高压泵（15000~35000KPa)流量稳定及梯度洗提装置3．进样装置4．色谱柱——分离5．检测器——分析6．废液出口或组分收集器7．记录装置灵敏度高，重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感高效液相色谱仪的色谱柱4.6mm或3.9mm球形填料不规则形填料5~10μm空柱管:200-300元国产填料国产装填=800-1000元进口填料国产装填=1200-1500元原装进口柱=2400

4、-3000元HPLC柱=空柱管+填料(分离介质)价格?高效液相色谱仪的生产厂家WatersAgillentShimadzPerkinElmerVarian大连依利特公司北京东西电子研究所制造商高效液相色谱仪LC-2010HT岛津（香港）有限公司新一代液相色谱∶AllianceAlliance产品名称：液相色谱仪器大连依利特返回四、HPLC的特点和应用“三高”“一快”“一广”高柱效(n=3万片/米),柱效高（远高于一般LC）高灵敏度(紫外检测器最小检出量达纳克级)高压(150*105~350*105Pa)分析速度快应用范围广泛（可分析80%有机化合物）HPLC应用医药方面：生物组织、血样、尿样分

5、析，药剂组分测定，药物生产控制，药代研究。生化方面：主要用于氨基酸、蛋白质、酶、糠尿。食品方面：果汁，饮料，酒类等中的添加剂。环境方面：饮用水，废水中质量标准的控制。大气、土壤污染研究正常对照组Fig2(controlgroup)诱导后3天组(Hydrocephalusofthe3day)诱导后8天组(Hydrocephalusofthe8day)诱导后4月组(Hydrocephalusofthe4month)狗脑积水不同时期脑组织中肌酸、磷酸肌酸及磷酸腺苷酸的含量变化CrCrCrCrpCrCrpCrpAMPAMPAMPAMPADPADPCrpADPATPATPATPATPADPHPLC法分析

6、心脏衰竭过程中黄连素对心脏能量的保护作用标准色谱图心肌样品色谱图CrCrpAMPAMPCrCrpADPADPATPATP标准品色谱图对照组色谱图FDP组色谱图CrpCrpCrpATPATPATPHPLC法分析人的心脏换瓣术中1，6-二磷酸果糖对高能磷酸复合物含量的影响HPLC法分析大鼠脑缺血再灌注后肌酸、腺苷和三磷酸腺苷的含量变化标准色谱图脑组织样色谱图ATPATPADOADOCrCrHPLC法分析经缺血预处理后大鼠移植肝脏中三磷酸腺苷的含量变化肝组织样色谱图标准色谱图ATPAMPAMPATPADPADP健康人空白血清色谱图给药后人血清色谱图HPLC法测定健康人血清中的头孢唑啉(CEZ)CEZ

7、HPLC法测定肺癌患者血清中维生素A、维生素E番茄红素、β-胡萝卜素标准色谱图血清样色谱图VAVAVEVEββLLHPLC法测定中草药提取物中紫杉醇的含量对照品色谱图样品色谱图紫杉醇紫杉醇12345大鼠尿中83-1除草剂及其代谢产物的HPLC分离图空白尿样染毒尿样*1大鼠肝微粒体中叶枯灵及其代射产物分离的HPLC色谱图aba.对照组b.样品组大鼠肝灌流中叶枯灵、代谢产物及其内标的色谱图(7)***