高效液相色谱分析ppt培训课件

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1、第三章液相色谱法简介3.1高效液相色谱分析法的特点1.高压采用高压泵使流动液能迅速通过色谱柱，一般达150×105～350×105Pa。2.高速高压带来高速，分析时间一般少于lh。3.高效柱效能约可达3万塔板/米（GC的柱效约为2000/米）。4.高灵敏度由于采用了高灵敏度的检测器，最小检测量可达10-9g，甚至10-11g。5.可用于高沸点的、不能气化的、热不稳定的以及具有生理活性物质的分析一、高效液相色谱法二、HPLC与GC差别1．分析对象的区别GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；但对高沸点、挥发

2、性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可检测。(占有机物的20%)HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品（包括有机介质溶液），不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测用途广泛。（占有机物的80%）2．流动相的区别GC：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相有相互作用。HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起正向作用。且流动相种类较多，选择余地广，改变流动相极性和pH值

3、也对分离起到调控作用，当选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相也可以增大分离选择性。3．操作条件差别GC：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）三、HPLC的应用applicationofHPLC1.环境中有机氯农药残留量分析固定相：薄壳型硅胶(37～50m)流动相：正己烷流速：1.5mL/min色谱柱：50cm2.5mm(内径)检测器：差示折光检测器可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。2.稠环芳烃的分析稠环芳烃多为致癌物质。固定相：十八烷基硅烷化键合相流动相：20%甲醇-水～100%甲醇

4、线性梯度淋洗，2%/min流速：1mL/min柱温：50ºC柱压：70104Pa检测器：紫外检测器第二节影响色谱峰扩展及色谱分离的因素影响分离的主要因素有流动相的流量、性质和极性。在高效液相色谱中,速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，而只有两项，即：H=A+Cu故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示：（1）流速：流速大于0.5cm/s时,H～u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。(2)液体的粘度比气体大一

5、百倍,密度为气体的一千倍,故降低传质阻力是LC中提高柱效的主要途径。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。1．分离原理：利用组分分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异分离前提：K不等或k不等一、液固吸附色谱法（LSC）流动相为液体，固定相为固体吸附剂第三节HPLC分离类型与原理2．固定相<>分为极性和非极性两类<>极性固定相：硅胶、氧化铝和氧化镁、硅酸镁分子筛等，其中极性硅胶应用最普遍。<>非极性固定相：多孔微粒活性碳、

6、多孔石墨化炭黑，以及高分子多孔微球等。1）硅胶：<>无定型硅胶最早使用，传质慢、柱效低<>薄壳型硅胶直径为30~40μm的玻璃珠表面涂布一层1~2μm厚的硅胶微粒，孔径均一、渗透性好、传质快，但柱容量有限。<>全多孔球型硅胶粒度一般为5~10μm，颗粒和孔径的均一性都比前两种好，柱容量大，为当今液固色谱固定相的主体，也是键合固定相的主要基质。原理-吸附特点-峰易拖尾适用-分离极性化合物2）高分子多孔小球：特点：柱选择性好，峰形好，柱效低适用：分离弱极性化合物3．流动相除了最基本的要求之外，主要考虑溶剂强度，溶解度

7、参数及极性参数等。1．分离原理：利用组分在两相中溶解度的差异2．固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法）缺点是固定液层的耐溶剂冲刷性能差，固定液易流失，从而导致柱效降低，被键合相填料所取代。3．正相色谱-固定液极性>流动相极性（NLLC）极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱，适于分离极性组分。反相色谱-固定液极性<流动相极性（RLLC）极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱适于分离非极性组分。二、液液分配色谱法（LLC）键合相色谱基本上属于分配色谱，与液液分配色谱固定相不同的是“固定液”以化学键的形式与载体结合

8、在一起的。常规化学键合相利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面1．分离机制：分配+吸附（以LLC为基础）2．特点：不易流失热稳定性好化学性能好载样量大适于梯度洗脱4.化学键合相色谱（CPC）三、离子色谱法（IC）1.离子交换色谱凡在溶液中能够电离的物质，通常都可以用离子交换色谱法进行分离，其主要根据固定相对待测离子对的亲和力的差异来实现分离。固定相类型：强阳离子交换剂