仪器分析笔记《高效液相色谱分析》

《仪器分析笔记《高效液相色谱分析》》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、第二章高效液相色谱分析§2.1高效液相色谱法概述（掌握）2.1.1高效液相色谱法的特点1、与经典液相色谱法比较经典液相色谱法高效液相色谱法色谱柱长/mm100〜2000100〜250柱内径/mm10〜503〜6填料粒径巾m75〜6003〜10柱前压力「MPa0.001-0.12〜20柱效（理论塔板数）/m2〜502X103〜5X104进样量/g1〜1010・6〜1()・2分析时间巾1〜200.05-1.02、与气相色谱法比较气相色谱法高效液相色谱法对样品要求容易气化或裂解有适当的溶剂溶解流动相惰性气体动力粘度10-P1-S柱前压力2〜30MPa极性

2、、非极性液体及缓冲溶液动力粘度10-3Pas柱前压力0.1-0.5MPa固定相种类较多粒度0.1—0.5mm种类较少粒度3〜lOjini色谱柱（内径（pXZ）；mmXm填充柱1〜4X1〜3毛细管柱0一25〜03X10〜100填充柱0一5〜6X0.1〜03毛细管填充柱0一03〜0.05X0.15〜05柱效（理论塔板数）.，m103〜104104〜105柱温比室温〜300室温〜60分离过程中的作用固定相—组分固定相―组分流动相分曷机制吸附、分配吸附、分配、离子交凝翩E阻影响分离的重要因素组分在气相中的扩散系数大，104cm2/s；柱温影响很大崖温〜30

3、0）；柱外效应及死体和影响较小组苓在液相中的扩散系数很小，10?cm2s；柱温影响很小温〜60）；柱外效应及死体积影响很大检测器通用型：TCD、FID专用型：ECD、FPD、NPD最高灵敏度:io-ng通用型：ELSD、RID专用型：UVD、PDAD、FD、ECD最高灵敏度:1042g应用范围永久性气体；〜350°C低沸点化合物（分子量：1〜10巧；易裂解的高分子化合物（分子量：102〜10彳）；可用于制备。离子型化合物；高分于量、高沸点化合物（分子量：50〜3X103）；高分子、生命活性化合物（分子量：1。3〜1Q6）；难用于制备3、高效液相色谱

4、法的发展A、固定相的变化填料粒度减小，粒型规整；键合型固定相；整体结构固定相；亲和固定相。目前，出现使用1.0im填料的超高压液相色谱。B、流动相变化目前，出现120〜220°C超热水为流动相、FID和FPD检测器的HPLC。C、全新方法剪切流路液相色谱；不同分离机制组合的多维液相色谱以及HPLC与MS、NMR、IR联用的多维液相色谱法。4.高效液相色寧法的特点①高压：采用高压输液设备，（150〜350）X105Pa②高速：分析速度快；③高效：柱效很高。（230000）,可以在数分钟内完成数百种物质的分离;④高灵敏度:10"9g（UV）；10_,,

5、g（荧光检测）。5、高效液相色谱法的局限①溶剂用量太大；②缺乏诸如气相色谱使用的TCD、FID通用型检测器；③不能替代气相色谱法,难分离化合物（柱效10万以上），必须使用毛细管气相色谱法进行分离;④不能替代中、低压柱色谱法，一些生物活性化合物不能承受200kPa〜IMPa压力。§2.2影响色谱峰扩展及色谱分离的因素（了解）2.2.1响宕谱峰药扌r農药@秦高效液相色谱法的基本概念及理论基础，与气相色谱法是基本一致的，其区别主要在于流动相的不同。现根据速率理论及色谱峰扩展及色谱分离的影响讨论如下：高效液相色谱的范氏方程：C0MCQ.〔2D.nDsJ若将

6、上式简化，可写作:DH=AvCu这与气相色谱的速率方程形式是基本一致的，主要区别在于纵向扩散项可以忽略不计，影响柱效的主要因素是传质项。1、涡流扩散项比=2眄式中—兄：填充不规则因子；〃岸填料平均直径。E它与载体流速无关;愆若柱子填充均匀，填料的颗粒也均匀，则QTOnHeTOd柱效高；若填充不均匀,2/=>//=>柱效低。2、纵向扩散项U式中——G：常数；Dfn：扩散系数；流动项的线速度。E由于分子在液体中的扩散系数比在气体中要小4〜5个数量级，因此在液相色谱中，当流动相线速度大于0.5cmL时,这个纵向扩散项对色谱峰扩展的影响实际上是可以忽略的,

7、而气相色谱法中这一项却是重要的。3、传质阻力项（1）固定相传质阻力项//$式中——c¥：与k（容量因子）有关的系数；df：固定液厚度；2：扩散系数。E固定相引起峰扩展解决办疝①液液分配色谱：使用薄的固定相；②吸附、排阻和离子交换色谱：使用小颗粒填料。（2）流动相传质阻力项①流动的流动相中的传质阻力项H,nm式中——C曲常数（与％有关，其值取决于柱直径、形状和填充的填料结构）;Dm：流动相中扩散系数；dp：为填充物的平均直径。②滞留的流动相中的传质阻力项Hsmsm“原因：多孔固定相造成的部分流动相滞留。Dm式中——C、.J常数（与颗粒微孔中被流动相所

8、占据部分的分数及容量因子有关）。E固定相的粒度TO=＞其微孔孔径Too=＞传质途径TO=＞传质效率Too=＞柱效=＞—＞O