《转基因动物》PPT课件

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1、转基因动物2012年12月主要内容基本概念转基因动物的命名目前制作转基因动物的主要方法转基因动物研究的意义及应用随着现代高新科学技术的发展，现代实验动物学已从过去注重于动物饲养管理和实验操作的宏观向微观方向发展。对小鼠基因组研究的目的不仅在于了解小鼠本身的基因结构，更主要的是为人类基因组研究、人类遗传疾病研究提供动物模型。一、基本概念转基因动物（Transgenicanimal）:是指以实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。外源基因随细胞分裂分配到所有子细胞中并遗传给后代严格说，转基因动

2、物有别于嵌合体。基本原理:目的基因或基因组片段受精卵或着床前胚胎细胞受体动物的输卵管或子宫中携带有外源基因的转基因动物转基因动物技术发展的四个阶段第一，实现外源基因的导入（随机整合）第二，实现导入的外源基因定点整合（同源重组，基因打靶技术）第三，实现导入的外源基因的组织特异性表达（借助于一系列组织特异性启动子的应用）第四，实现导入的外源基因的时间特异性表达（应用Cre/loxP重组酶系统）二、命名1．符号(1)一个转基因符号由以下三部分组成：TgX(YYYYYY)＃＃＃＃＃Zzz，TgX=方式；(YYYYYY)=插入片段标

3、示；＃＃＃＃＃=实验室指定序号；Zzz=实验室注册代号；(2)方式—TgX转基因符号通常冠以Tg字头。随后的一个字母X，表示DNA插入的方式：H代表同源重组；R代表经过逆转录病毒载体感染的插入；N代表非同源插入。（3）插入片段标示—(YYYYYY)是由研究者确定的表明插入基因显著特征的符号。通常由放在圆括号内的字符组成：可以是字母（大写或小写），也可由字母与数字组合而成，不用斜体字，上下标、空格及标点等符号。应注意以下几点：1）标示应简短，一般不超过六个字符。2）如果插入序列源于已经命名的基因，应尽量在插入标示中使用基因的

4、标准命名或缩写，但基因符号中的连字符应省去。3）插入片段标示只表示插入的序列，并不表明其插入的位置或表型。一些标示的标准命名缩写：An匿名序列；Ge基因组；Im插入突变；Nc非编码序列；Rp报告基因；Sn合成序列；Et增强子捕获装置；Pt启动子捕获装置。（4）实验室指定序号及实验室注册代号实验室指定序号：是由实验室对已成功的转基因系给予的特定编号，最多不超过5位数字。而且，插入片段标示的字符与实验室指定序号的数字位数之和不能超过11。实验室注册代号：是对从事转基因动物研究生产的实验室给予的特定符号。2.举例C57BL/6J

5、-TgN(CD8Ge)23Jwg：来源于美国杰克逊实验室（J）的C57BL/6品系小鼠被转入人的CD8基因组（Ge）；转基因在JonW.Gordon(Jwg)实验室完成，获取于一系列显微注射后得到的序号为23的小鼠。转基因符号缩写:C57BL6J-TgN23JwgTgN(GPDHIm)1Bir以人的甘油磷酸脱氢酶基因（GPDH）插入（C57BL/6JXSJL/J）F1代雌鼠的受精卵中，并引起插入突变（Im），这是EdwardH.Birkenmeier(Bir)实验室命名的第一只转基因小鼠。根据转基因动物命名原则，如果转基因

6、动物的遗传背景由不同近交系或远交群混合而成时，该转基因符号不使用动物品系或种群的名称。缩写：TgN1Bir三、遗传修饰动物模型的建立方法1、转基因技术：目的基因整合受精卵（或胚胎干细胞）导入受体子宫发育成含目的基因的个体，此个体能把目的基因遗传下去。2、核移植技术:又称动物整体克隆技术。将一个体细胞的核导入另一个体的去核卵细胞中，使之发育成个体。3、基因剔除技术：又称基因靶向灭活。指有目的地去除动物体内某种基因的技术。基本原理是同源重组技术。导入基因的主要方式显微注射法ES细胞法电穿孔脂质体逆转录病毒感染法精子载体导入法等

7、（一）雄原核显微注射法以单细胞受精卵为靶细胞，利用显微注射技术将构建好的载体DNA直接注射入受精卵的原核，再将接受注射的受精卵移入假孕母体输卵管继续发育获得转基因动物个体。目前应用较广泛，最早最经典的方法。一、设计转基因构件1、目的基因的获取2、基因载体（复制子）的选择与构建3、目的基因与载体的连接（连接酶）：重组DNA分子二、动物操作1、准备假孕母鼠（养母）2、受精卵的准备3、基因导入4、胚胎移植5、对幼鼠的鉴定转基因工作需要的动物1、需要的野生型小鼠类型包括：幼龄雌鼠（21-28天）用作胚胎供体；成年雄鼠；成年雌鼠，作

8、为胚胎移植的受体；输精管结扎的雄鼠，用来产生假孕雌鼠；青年野生型雄鼠和雌鼠，与转基因鼠交配，建立转基因品系。2、从胚胎移植到成年小鼠总计约11周的时间胚胎移植约19天幼鼠约21天断乳小鼠约4-5周成年小鼠约19天幼鼠。原核注射法制备转基因鼠技术路线优点：外源DNA大小基本不受限制（1-50kb）；导入过