转基因动物ppt课件

《转基因动物ppt课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、6转基因动物转基因动物是动物基因工程在医学生物学研究中的突出成果。近十年来，为分子遗传学、发育生物学、医学遗传学、肿瘤研究及优良经济动物的开发研究等多方面做出了很大的贡献。一、转基因动物的概念转基因动物(transgenicanimal)是指以实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。严格说，转基因动物有别于嵌合体。嵌合体动物:chimericanimal只有部分组织细胞的基因组中整合有外源基因。逆转录病毒感染法、胚胎干细胞介导法制备的动物第一代均为嵌合体。雄原核显微注射法制备的动物第一

2、代中1-10%为嵌合体（延迟整合）。Chimera：来源于一个以上的受精卵Mosaic：来源于同一个受精卵二、转基因动物的发展历史1974年首次转基因小鼠1980年首次转人类基因小鼠1982年Palmiter等运用此法得到的所谓“超级巨鼠”,曾引起整个生物学界的轰动。转大鼠生长激素基因的“超级”小鼠到目前为止，人类已获得转基因鱼、鼠、羊、猪、兔、牛等等大小动物。从转基因动物所获得的资料几乎涉及医学遗传、肿瘤学、免疫学等的基因研究，还涉及生物药物的研究，基因治疗的开发研究等。世界首只转基因猴无父双母小鼠世界上首匹“自体克

3、隆马”“连连”、“田田”和“云云”携带鸡IBDV基因的转基因绵羊携带人mAAT蛋白基因的转基因山羊“不传播疟疾”的转基因蚊子三、动物转基因的方法1、受精卵雄原核显微注射法2、胚胎干细胞（ES细胞）法3、逆转录病毒感染法4、体细胞核移植法5、精子载体法6、YAC法1、雄原核显微注射法以单细胞受精卵为靶细胞，利用显微注射技术将构建好的载体DNA直接注射入受精卵的原核，再将接受注射的受精卵移入代孕母体输卵管继续发育获得转基因动物个体。目前应用较广泛,最早最经典的方法这一方法的实验程序如下：⑴准备代孕母鼠（养母）⑵受精卵的准

4、备⑶基因导入⑷胚胎移植⑸对幼鼠的鉴定其成功率的高低主要取决于受精卵和胚胎发育的时间。基因的整合是随机的，多数插入单一染色体位点中。外源基因的插入会引起宿主基因的DNA序列重排，缺失，重复或易位。外源基因也可不插入呈游离状态，以质粒形式存在表达功能并传给子代。其详细机理现在也不是很清楚。优点：外源DNA大小基本不受限制(1-50kb)导入过程直观整合率高缺点：设备昂贵、环节较多对操作人员有较高的技术要求低效率（尤其是大家畜）对卵细胞伤害大，胚胎存活率低基因整合随机性转基因沉默2、胚胎干细胞（ES细胞）法ES细胞是早期胚胎

5、的内细胞团经过体外培养建立起来的多潜能细胞系。将携带有外源基因的ES细胞注入到动物的早期胚胎内，可产生嵌合体及转基因动物。它本身是二倍体，能在体外培养，具有高度的全能性，可以形成包括生殖细胞在内的所有组织，并且在不同的培养条件下表现出不同的功能状态。在ES细胞上的基因操作：可以通过逆转录病毒感染、脂质体介导、电穿孔、磷酸钙共沉淀等方法将外源基因导入ES细胞。因此，借用ES细胞系可将人们企望的某种不完整的、无功能基因直接引入到ES细胞中，通过细胞增殖、筛选可得到丧失了某种基因功能的动物后代。胚胎干细胞法获得转基因鼠Gen

6、eratingESCells优点：外源基因整合情况的可控性高。可预先在细胞水平检测外源基因的拷贝数、定位、表达的水平及插入的稳定性。外源基因导入ES细胞的方法多样，细胞鉴定及筛选方便。缺点：ES细胞系建立及培养困难。维持ES细胞的未分化及多向分化潜能不易。所得个体为嵌合体目前，胚胎干细胞介导法在小鼠上应用比较成熟，在大动物上应用较晚。3、逆转录病毒感染法将目的基因重组到逆转录病毒（LTR）载体上，制成高滴度病毒颗粒，人为感染着床前后的胚胎（也可直接将胚胎与能释放逆转录病毒的单层培养细胞共同培养以达到感染目的）,获得转基

7、因动物的方法。P123图6-2优点：受精卵携带外源基因的阳性率高外源基因多单拷贝整合操作简单，避免注射法对卵细胞的损害宿主范围广可同时感染大量胚胎，感染率及胚胎存活率高缺点：潜在的致癌性载体构建较复杂容纳大小有限整合率不高重组逆转录病毒不稳定，可能干扰外源基因的表达胚胎的自我保护机制对其有抗性4、体细胞核移植法将外源基因导入到体细胞中，再将该细胞进行培养，选择其中带有外源基因的细胞进行扩增，用这种细胞的细胞核进行核移植（把体细胞核植入一个去了核的未受精卵中，融合并激活），将重组胚进行体外培养或者植入同步化的代孕动物的输

8、卵管。在理论上应该全部为阳性转基因动物，而且外源基因的表达稳定，外源基因的整合率可达100%。1997年，英国：Wilmut等的克隆羊Dolly1999年,中国陈大元：利用兔的卵母细胞获得种间核移植的大熊猫胚胎2000年，美国：转基因牛世界首只克隆羊多莉转人基因公牛与它的孩子们优点：转基因的效率高，不仅具有“ES细胞途径”的全部优