荧光STR直接复合扩增试剂缓冲体系的研制_赵兴春

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1、中国法医学杂志CHINJFORENSICMED2012年第27卷第5期·论著·荧光STR直接复合扩增试剂缓冲体系的研制1211赵兴春，姜伯玮，季安全，叶健(1．公安部物证鉴定中心，北京100038;2．中科院上海应用物理研究所，上海201800)【摘要】目的研制适用于数据库样本荧光STR直接复合扩增体系。方法针对常规血卡、FTA和903血卡样本，配制扩增缓冲液基准母液，采用不同配方的扩增缓冲体系进行直接扩增及检测。考察不同种类增强剂、4种商业化DNA聚合酶、不同复性温度和终延伸时间对检材的检测效果，并验证优化体系的适应性。结果采用本文所建体系对各类血卡样本进行检验，均可

2、获得样本清晰、完整的STR分型。体系选择BSATween20DMSO甘油等增强剂组合、Typer热启动聚合酶1.5U/10μL、57～59℃复性温度、30～50min终延伸时间，采用10μL体系即可对直径1.2mmFTA卡血样进行有效分型。结论本文所研制的缓冲体系能够满足常规血卡、FTA和903血卡样本直接扩增检验的需要。【关键词】法医物证学;直接扩增;复合扩增;缓冲体系【中图分类号】DF795.2【文献标识码】A【文章编号】1001－5728(2012)05－0359－05DevelopmentandapplicationofafluorescentSTRmul

3、tiplexassayforthedirectamplificationof1211forensicdatabasesamples(ZhaoXingchun，JiangBowei，Jianquan，YeJian/1.InstituteofForensicScienceMinistryofPublicSecurityP．R．C，Beijing100038，China;2.ShanghaiInstituteofAppliedPhysicsofChineseAcademyofSciences，Shanghai201800，China)【Abstract】ObjectiveTo

4、developadirectmultiplexamplificationreagentsystemandexamineitsvalidityusingforensicDNAdatabasesamples．MethodsSeveraldirectPCRbufferbasedonstandardbufferwereprepared．Theperformanceofbufferweretestedbydirectamplificationofdifferentsamples，suchasbloodstainsonfilterpaper，FTAcardand903card．Th

5、eeffectsofdifferentPCRenhancers，DNApolymerase，annealingtemperatureandfinalextendedtimeonamplificationwereexamined．Thesuitabilityofoptimizedreagentsystemwasalsoinvestigated．ResultsWiththeassayestablishedbythisstudy，reliable，completeandhighqualitySTRprofileswereobtainedfromforensicdatabase

6、samples．Under57～59℃annealingtemperatureand30～50minfinalextendedtimes，completeSTRprofilescouldbeobtainedfrom1.2mmFTAbloodstainsusing10μLofreactionvolumeofoptimizedreagentsystemcontainingBSA，Tween20，DMSO，GlycerolandTyperDNApolymerase．ConclusionThedevelopedreagentprovidesaaccurately，quickly

7、andefficientlyapproachforhigh-throughputidentificationofforensicDNAdatabasesamples．【Keywords】forensicbiologicalevidence;directamplification;multiplexamplification;buffersystem直接扩增技术又称直接PCR(directPCR)或免提据库样本检验的需要。取扩增技术，是指将未经DNA提取或其它前处理的1材料与方法［1-2］样本直接加入PCR反应体系并获得扩增产物。直接扩增主