《组织学技术》PPT课件

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1、实用组织学与细胞化学研究技术组织学技术一组织学技术的发展与应用内容：组织学制片技术、胚胎学制片技术、组织化学技术、荧光技术、免疫组化技术、组织培养技术、组织工程技术等。光学显微镜技术：特殊显微镜技术（荧光、倒置、相差）、显微摄影技术等电子显微镜技术：电镜技术、电镜细胞化学技术等应用：Hooke发现细胞，1811年改良了显微镜—组织学基础。但是，不能看到透明的切片标本。1851年，发现卡红可染细胞核，1865年，苏木精能染细胞核。十九世纪20年代Feulgen创立核酸反应。30年代，相继发明了相差显微镜。特别是，50年代组织化学与电镜技术迅速发展和提高，组织学技术进入了新时期。二组织切片方法

2、分类1．切片法：石蜡切片、明胶切片、火棉胶切片、电镜超薄切片等（微米）2．涂片法：血液等液体3．磨片法：骨等坚硬组织4．分离制片法：分离单个细胞—平滑肌细胞、肝细胞等5．印片法：肝、脾、淋巴结等6．活体制片：注射胎盘兰等，观察巨噬细胞的活动7．超活体染色制片：活体观察精子形态与活动等8．整体切片法：用大型切片机，人胚、肝、肾、脑等组织制片技术普通制片技术—HE切片术一基本程序(一).动物取材必须根据科研或教学的目的与要求确定，医学领域以人的材料为最好，高级动物猴、猫、狗、豚鼠、大鼠、小鼠等。动物麻醉法：1．乙醚吸入麻醉：小鼠、大鼠、豚鼠等。在玻璃缸内进行。2．注射麻醉法：苯巴比妥、乌拉坦等

3、，猴、猫、狗、兔等大型动物，静脉或腹腔注射。3．直接杀死法：小鼠、大鼠、豚鼠等，用金属器械猛击后脑部—第四脑室区。取材顺序：1．腹腔器官：肝、胆、胃、肾上腺、胰、脾、十二指肠、空肠、回肠、结肠等2．胸腔器官：心脏、肺3．盆腔器官：膀胱、卵巢、输卵管、子宫等4．神经系统：大脑、小脑、脊髓等5．眼球、内耳（二）固定目的：保持组织内细胞的形态、结构及其化学组成，使与生活时原有形态、结构及化学组成相似。1．蛋白质、脂肪、类脂体、酶等沉淀或凝固—抑制自溶。2．组织内各种不同物质产生不同的折光率，便于显微镜下观察。3．某些固定剂可起到硬化作用，有利于组织切片：甲醛、乙醇、氯仿等。4．某些固定剂可起到媒

4、染作用：重铬酸等。固定具体方法：1．小块固定法1×1×0.3cm（不超过0.5cm厚）。2．整体固定法（小动物——灌流法），效果好。固定液能迅速渗透到各器官、组织。具有一定硬度，有利于薄切。可避免因取材时间过久—保持新鲜状态。3．蒸汽固定法用于涂片、印片等（骨髓涂片、淋巴印片）。固定液：应具有以下性能1.对蛋白质、脂肪、类脂体、碳水化合物等具有沉淀、凝固作用。2.具有一定穿透力—迅速进入组织。3.对组织不引起收缩或膨胀。4.对组织产生一定的硬化作用。5.具有一定pH值。6.对染色无副作用。常用固定剂：1.单纯固定剂：甲醛、乙醇、丙酮、重铬酸甲、锇酸等。甲醛：常用，pH值为中性。穿透组织速度

5、快，固定均匀，组织收缩小。它是蛋白质最好的固定剂，在组织化学中广泛应用。乙醇：常用的固定剂与保存剂，穿透组织速度快。具有固定、凝固蛋白质作用，亦具有硬化组织和脱水等作用。丙酮：可作固定剂与脱水剂，对某些酶（碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等）固定效果好。锇酸：强氧化剂，不能与甲醛、乙醇等混合。使蛋白胶状固定而不发生沉淀，为脂肪、类质脂、髓鞘等优良固定剂。目前为电镜标本常用的固定剂。2.混合固定剂：甲醛混合固定剂、乙醇混合固定剂、丙酮混合固定剂、重铬酸甲混合固定剂、锇酸混合固定剂等。（三）冲洗目的：1．停止固定液继续对组织的作用。2．除去组织中多余的固定剂，以免影响染色。方法：1.简易流水冲洗法。2．

6、系列玻璃瓶或水槽冲洗法。(四）脱水目的：1.除去组织中含有的水分—脱水。2.脱水后便于石蜡包埋等。脱水剂：乙醇、丙酮、正丁醇等。方法：由低浓度逐渐升高浓度，以避免组织收缩。2～3mm5mm50%Alc6～8h6～12h70%6～8h6～12h（过夜）80%4～6h6～8h95%（Ⅰ）2～4h3～6h95%（Ⅱ）2～4h3～6h100%（Ⅰ）1～2h2～4h100%（Ⅱ）1～2h2～4h（五）组织透明乙醇不能与石蜡混合，需要经过一种乙醇与石蜡之间媒浸物，即透明剂。透明剂可能取代乙醇而使组织呈透明状，而液态石蜡则可取代透明剂乙醇进入组织。当液态石蜡形成固态之后，便于薄切。常用透明剂：二甲苯易挥

7、发，折光率1。497，沸点144，透明力强。此外，甲苯、苯、氯仿、丁香油等。步骤：1．先二甲苯：纯乙醇（1：1）2．二甲苯（六）包埋1．渗蜡（浸蜡）：重要步骤。熔化为液态的石蜡透过组织间隙进入到组织中。步骤：（1）软蜡：熔点54～560C透蜡（2）硬蜡：熔点56～580C渗蜡以上均在温箱中进行。不能超过600C，否则变脆、收缩。2.包埋：硬蜡60～620C（七）切片切片机：回转切片机、滑动切片机、冷冻切片机等切片是整个制