组织学基本技术.ppt

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1、组织学基本技术内容提纲组织的概念及研究内容组织学技术简介组织标本的制备组织化学与免疫组织化学术组织学的学习方法1.组织学（Histology）概念研究机体的微细结构及其相关功能的科学。2.研究内容是在细胞水平、亚细胞水平和分子水平上对机体进行研究。一、组织学概念及研究内容二、组织学技术简介显微镜技术组织化学术图像分析术细胞培养术和组织工程显微镜技术16世纪末，荷兰的眼镜商詹森（ZacchariasJanssen）和他的儿子把几块镜片放进了一个圆筒中，结果发现通过圆筒看到附近的物体出奇的大，这就是现在的显微镜

2、和望远镜的前身。詹森制造的第一台复合式显微镜。其基本原理是使用两个凸透镜，一个凸透镜把另外一个所成的像进一步放大。显微镜的发展史世界上的第一架显微镜是荷兰眼睛匠詹森父子在1590年前后制成的，效果不理想。前后经过伽利略和胡克改良，效果较好。1878年，制成现代的光学显微镜。20世纪30年代，制造了第一架电子显微镜。1981年，扫描隧道显微镜应运而生。根据光源不同，显微镜分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光为光源，后者则以电子束为光源。—、光学显微镜（一）普通光学显微镜（二）荧光显微镜（三）激光共聚

3、焦扫描显微境（四）暗视野显微镜（五）相差显微镜（六）偏光显微镜（七）微分干涉差显微镜（八）倒置显微镜显微镜技术尼康E-600光学显微镜普通光学显微镜由二部分构成：①光学部分：包括聚光镜、物镜和目镜；②机械部分：包括镜臂、载物台等。尼康E-600光学显微镜尼康E800荧光显微镜荧光显微镜由光源、滤片系统和显微镜三部分构成。光源为高压汞灯，用以产生波长短、能量高的紫外光。原理：紫外光激发标本中的荧光物质，使之产生各种不同颜色的荧光，通过观察荧光的分布与强弱来测定被检物质。研究内容：观察组织、细胞中有自发荧光或经

4、荧光染料染色或标记的结构。莱卡倒置显微镜倒置显微镜：组成和普通显微镜一样，不同处物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之上，后者在载物台之下。研究内容：观察细胞培养中活细胞的形态结构和生长变化情况。倒置相差显微镜：具有相差物镜，使活细胞的不同结构出现显著的明暗反差，并具有立体感。二、电子显微镜透射电镜扫描电镜透射电镜观察细胞的内部结构观察细胞表面的立体结构扫描电镜透射电镜标本制备步骤取材（约1mm3）双重固定（双醛固定液和四氧化锇）树脂包埋超薄切片重金属染色电镜观察脱水扫描电镜标本制备步骤取材（直径约0.3cm）

5、双重固定（双醛固定液和四氧化锇）脱水干燥喷镀电镜扫描观察显微组织标本的制备有多种方法，例如：切片法（石蜡切片和冰冻切片）、涂片法、铺片法、磨片法等。组织学中最常用的方法是石蜡切片法。三、显微组织标本的制备三、显微组织标本的制备组织制片的意义和目的组织标本制作的方法组织切片标本制作的基本程序苏木精-伊红染色的程序组织制片的意义和目的组织制片技术是随着生命科学的发展而不断进步的。利用组织切片染色(staining)的方法所制出的标本显示了各种组织细胞的不同结构和形态，它们之间的相互连接及它们之中的某些化学成分的

6、种类和含量的变化，为细胞分子学的研究提供了最直观的依据。因此，组织制片是研究医学和生物学的一个最基本和最重要的手段。组织标本制作的方法组织切片法非组织切片法组织切片法：利用化学试剂将组织经过一系列的固定(fixation)、脱水、透明后，再利用石蜡或火棉胶和明胶等支持物渗透进组织内部，使组织保持一定的硬度，并包埋(embedding)成块，然后依靠切片机(microtome)将包埋好的组织块切成以微米计的薄片，再根据需要进行各种染色得到的供显微镜下观察的标本的方法。包括：石蜡切片、火棉胶切片、明胶切片，冰冻

7、切片。组织不经过切片手续制成的观察标本的方法为非组织切片法。包括：涂片、压片、铺片、磨片、消化分离、活体标本、整装标本、血管注射标本。涂片：将所采的血液或骨髓样品涂抹于载玻片上经瑞氏或姬姆萨染色后的标本。压片：先将组织处理成小块物质，然后经化学药品软化和染色，再用盖玻片压封于载玻片上的标本。例如运动终板等。非组织切片法铺片：将需要观察的薄片组织用手工的方法直接铺于载玻片上，然后经过固定、染色等程序制成的标本。例如蛙的肠系膜铺片，大白鼠的皮下组织铺片等。磨片：骨，牙齿等组织，不经脱钙和切片，直接在磨石上用手工

8、磨成大约50微米左右的薄片，然后再进行染色封固在载玻片上的标本。消化分离：将组织分离成小块，然后利用相应的化学药品水溶液将其细胞间质消化溶去，再用机械分离的方法，如利用水的震荡冲击力等，使小块组织分离成单个而又完整的细胞，经染色后涂于载玻片上封固的标本。例如平滑肌分离标本，脊髓的运动神经细胞等。活体标本：将所采的观察标本加生理盐水后直接滴于载玻片上在显微镜下观察。整装标本：一种是将胚胎或小动物经前期固定后整体封藏