《基本技术》PPT课件

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1、第一章基本技术实验室设置基本技术培养基及其配制外植体接种培养第一节实验室设置实验室组成基本设备配置培养容器与用具细胞工程实验室的基本要求实验准备—包括培养基配制，洗涤与灭菌等无菌操作控制培养CultureroomPreparationroomSterili-zingroomSterileoperationCytologyroomTransi-tionarea实验室布局示意图基本实验室准备室准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件好。接种室接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。为了保持清洁，接种室应防止空气对流。培养室培养室的功能是对

2、离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。辅助实验室细胞学实验室其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。摄影室及暗室其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有条件的情况下可建立此实验室。生化分析室在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。基本设备配置基本设备灭菌设备光照培养室与设备无菌操作设备细胞学鉴定设备天平，冰箱，酸度计，纯水器活性成分过滤灭菌接种工具随时消毒培养基灭菌玻璃器皿灭菌防止空气对流定期消毒保持干燥

3、,控制光照和温度精确培养使用特殊设备培养容器与用具玻璃容器塑料容器金属用具塑料用具倒置显微镜研究显微镜激光共聚焦第二节细胞工程的基本技术一、无菌操作技术二、细胞培养技术三、细胞融合技术四、单克隆抗体技术一、无菌操作技术细胞工程的所有试验都要求再无菌条件下进行，要求十分严格的无菌操作。1、无菌室；2、超净工作台；3、生物材料的消毒；4、试验器械、器皿和药品的灭菌。一、无菌操作技术洗涤技术灭菌技术洗涤剂合成洗涤剂铬酸洗涤液常用的铬酸洗涤液配方成分强酸溶液中酸溶液弱酸溶液重铬酸钾(g)63120100硫酸(ml)1000200100蒸馏水(ml)2002001000注意事项在蒸馏水中缓慢加入浓硫酸，

4、加热的同时分次加入磨碎的重铬酸钾至其完全融解。重铬酸钾加蒸馏水后加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸。玻璃器皿洗涤新的玻璃器皿新的玻璃器皿上附有游离的碱性物质，其洗涤方法是用1%的HCl溶液浸泡一昼夜，再用合成洗涤剂洗刷，然后用清水反复冲洗，最后用蒸馏水冲洗1～2次，干燥后即可使用。已使用过的试管、烧杯、三角瓶先将器皿中的残渣除去，用清水洗净，再用合成洗涤剂洗刷，用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1～2次。吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品需先放入铬酸洗涤液中浸泡两小时以上，取出后经流水冲洗半小时左右，再用蒸馏水冲洗1～2次，然后烘干或晾干。载玻片和盖玻片容易破碎，洗涤时不宜用力擦洗，其洗涤方法是先用清

5、水冲洗，然后放入铬酸洗涤液中浸泡几小时或用稀铬酸洗涤液煮沸半小时，取出后用清水冲洗干净，将其储藏在95%的酒精中。塑料用品洗涤一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较强，因此冲洗时必须反复多次，最后用蒸馏水冲洗。金属用品洗涤金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤，需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。培养基：湿热灭菌，即高压高温蒸汽灭菌.玻璃器皿：湿热灭菌或干热灭菌，即在烘箱中加热至150℃40分钟，或120℃2小时.金属器皿：干热灭菌.接种室：接种室常采用定期熏蒸，熏蒸剂常用甲醛加高锰酸钾，一般每100ml甲醛加5g高锰酸钾活性成分过滤灭菌接种工具随时消毒培养基灭菌玻璃器皿灭菌培养基体积与灭菌时间的

6、关系培养基体积（ml）灭菌温度（℃）灭菌时间（min.）20－501212050－50012125500－500012535二、细胞培养技术细胞培养是指动物、植物和微生物细胞在体外无菌条件的保存和生长。1、取材和除菌；2、配制培养基，对培养基进行灭菌；3、接种、培养和传代。二、细胞培养技术动物细胞培养类型：原代培养细胞（primaryculturecell）继代培养细胞（sub-culturecell）细胞株（cellstrain）正常二倍体，接触抑制细胞系（cellline）亚二倍体，接触抑制丧失植物细胞类型：原生质体培养（体细胞培养）单倍体细胞培养（花药培养）非细胞体系（ce

7、ll-freesystem）动物细胞培养原代培养(primaryculture)原代培养是指从直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养，因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。细胞株(cellstrain)通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特