oxLDL及炎性因子对ABCA1功能和表达的影响及相关信号转导机制的探讨

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1、华中科技大学博士学位论文oxLDL及炎性因子对ABCA1功能和表达的影响及相关信号转导机制的探讨姓名：吴凡申请学位级别：博士专业：生物化学与分子生物学指导教师：屈伸20040401!±!!壁查!旦堕!竺堕堡主塑查!!!!!!ABCAlASLDLoxLDLacLDLHDLapoA-IRCTTCECFCPKCPMALXRRXRH'ARLPSIFN．YTNF．dILl．B22R．HCCPM主要缩略词ATPbindingcassetIetransporterA1atherosclerosislowden

2、sitylipoproteinoxidizedlowdensitylipoproteinacetylatedlowdensitylipoprotcinhighdensitylipoproteinapolipoproteinA-1reversecholesteroltransporttotaIcholesteroIeflefifiedcholesterolfreecholesteroIproteinkinaseCphobol12-mytistate13-acetateliverXreceptorr

3、etinoidXreceptorperoxisomeprollferator-activedreceptorI{popoIysaccharideinterferon-7tumornecrosisfactor．0LinterleukinI-O22(R)-hydroxycholesterolcountperminutATP结合盒转运子Al动脉粥样硬化低密度脂蛋白氧化型低密度脂蛋白乙酰化低密度脂蛋白高密度脂蛋白载脂蛋白A．I逆向胆同醇运输总胆闹醇胴『刊醇酯游离胆例醇蚩向激酶C(12一)十四酸佛波酯(-

4、13．)乙酸盐肝x受体维甲酸X受体过氧化物酶体增生物激活受体脂多糖Y-干扰素肿瘤坏死冈子．a向细胞介索1-13反式22．羟基胆同醇每分钟计数(放射活性)摹中斜拄天孽同清鼍学院博士希主(2004)SRSREbpkbPCRGAPDHBSAFBS1640TBRARSscavengerreceptorsterolregulatoryelementbasepair(s)kilobasepair(s)polymerasechainreactionglyceraldhyde3-phosphatedehydro

5、genasebovineserumalbumenfbtalbovineSerumRPMII640nutritionmediumthiobarbiturieacid．reactivesubstance清道大受体I州醇调控元什碱基对千碱基对聚合酶链式反虑3一磷酸甘油醛脱氢酶牛m清白蛋白胎牛血清RPMI1640营养培养基硫代巴比妥酸激活反应底物!±璺苎查!苎苎兰羔堕堡兰堕兰!!!!生——oxLDL及炎性因子对ABCAl功能和表达的影响及相关信号转导机制的探讨博士研究生：吴凡导师：屈伸教授华中科技大学同

6、济医学院生物化学与分子生物学系，武汉，430030全文摘要ATP结合盒转运子A1(ATP—bindingcassettetransporterAI，ABCAI)是一种整合于膜上的转运蛋白，属于ABC蛋白超家族。它可以帮助胞内的游离胆固醇、磷脂与载脂蛋白A—I(apoA-I)结合形成新生的高密度脂蛋白(HDL)，促进胞内胆固醇外排，在机体清除多余脂质的过程中发挥重要作用。近年来的体内外实验均表明ABCAl与动脉粥样硬化、冠心病的发生密切相关，但关于它具体的转运机制和调节方式尚未完全阐明。oxLDL

7、和炎症因子是致动脉粥样硬化的重要因素，目前还不清楚它们对ABCAl表达和功能的影响。本研究以小鼠巨噬细胞系RAW264．7为模型。观察oxLDL和acLDL诱导该细胞转变为泡沫细胞的过程中ABCAl表达和功能的变化，以及炎性细胞因子、LPS在此过程中对ABCAl表达和功能的影响。从一新的角度来探讨oxLDL和炎症因子致动脉粥样硬化的机制。全文共分为三个部分。第一部分oxLDL对小鼠巨噬细胞ABCAI功能和表达的影响为探讨oxLDL对ABCAl功能和表达的影响，了解oxLDL导致胆固醇外排障碍与A

8、BCAI的关系，实验中分别以1001xg／mlacLDL和oxLDL孵育RAW264．7细胞24h，然后应用胆固醇外排实验、半定量RT-PCR、Westernblot，!±塑丝查!苎堕竺!堕堡兰塑圭!!!!竺观察oxLDL及acLDL对小鼠巨噬细胞内ABCAl功能、mRNA及蛋白质表达的影响：并检测了oxLDL和acLDL诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞内堆积的胆固醇的含量和种类。结果显示：acLDL孵育组和oxLDL孵育组细胞内ABCAl．apoA．I介导的胆固醇外排均随时I剐延长而增加，但在各时间