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1、河北渔业2007年第6期(总第162期)加工制冷海带硫酸酯多糖的酶法提取工艺条件刘群徐中平(日照职业技术学院,山东日照276826)摘要实验研究了纤维素酶提取海带硫酸酯多糖的工艺条件,通过单因素实验和正交实验,确定了最佳提取工艺条件为:粒度80~100目,固液比150,提取时间4h,酶加入量60g/kg,提取率为5641%,是热水提取工艺的193倍。关键词纤维素酶硫酸酯多糖提取条件正交实验硫酸酯多糖又称多糖硫酸酯,是从水生生行样的平均值。物、动物组织中提取分离的一系列糖复合物。褐122海带硫酸多糖的提取工艺
2、藻多糖硫酸酯是从褐藻中提取的一类硫酸化多酶解提取法:取海带加水浸泡2h,溶胀后糖,主要有岩藻糖和硫酸基组成,是高度3-支的海带粉碎成海带浆(含水量93%,w/w),向链化的(1-2)或(1-3)连接的-L-岩藻海带浆中加水1~2倍体积的水搅匀,加入柠檬[1]糖-4-硫酸酯。对褐藻多糖硫酸酯进行的广酸调pH为45~50,再加入纤维素酶,于泛研究表明其具有多种生物活性,包括抗凝血、50保温搅拌4h,不时搅拌,然后加入1倍体降血脂、抗肿瘤、抗病毒以及免疫调节作积水升温至90,冷至室温过滤。再加一倍体[2-3]用。积的水搅拌30min后过滤,合并滤液。取一定海带是中国最重要的人工养
3、殖经济藻类,研量滤液测多糖含量。究发现海带褐藻多糖硫酸酯具有抗肿瘤、降血脂热水提取法:取海带加水浸泡2h,溶胀后和治疗慢性肾功能衰竭等作用[4]。的海带粉碎成海带浆(含水量93%,w/w),向传统提取海带硫酸酯多糖多采用热水稀酸提海带浆中加水1~2倍体积的水搅匀,加入盐酸,[5][6]使pH约为2(或使HCl浓度约为01mol/L),取法、海带水碱凝沉物。酶解提取法是最近出现的工艺,在海带浸提时加入纤维素酶,可90保温4h,不时搅拌,然后再加入1倍体积充分破坏海带的组织结构,从而提高多糖的提取水,冷却后过滤。取一定量滤液测多糖含量。率。2结果本文对海带硫酸酯多糖的酶解提取工艺进
4、行研究,并与传统的热水提取方法进行比较,对海21单因素实验带的综合开发及提高其经济价值具有实际意义。211酶加入量对海带硫酸多糖提取的影响取80~100目海带粉、按固液比150(海带与1材料与方法水的质量比)、pH为45~50、提取温度50、11材料提取时间4h,在不同的加酶量下提取,测定提海带:产自海带产自荣成俚岛海域六月份采取液中多糖的含量,结果见表1。表1酶加入量对海带硫酸多糖回收量的影响收的人工养殖海带,晒干后阴凉干燥处存储。-1-1纤维素酶:淄博梅康特酶工程有限公司。其酶加入量/gkg干海带多糖回收量/gkg干海带他试剂均为国产分析纯。204
5、651167离心机:北京医用离心机厂。40488207412方法605346149121实验方法多糖含量测定采用苯酚-硫805666074[7]酸法,测定时取三个平行样,结果数据为平-55-河北渔业2007年第6期(总第162期)加工制冷由表1可见,随着酶量的增加,多糖含量逐条件的限制,很难得到这么细的藻粉,故无法对渐增加,而在加酶量60g/kg干海带以后,多糖它进行进一步的研究。而多易得到80~100目藻含量趋势平缓,可能因为酶浓度已逐渐被底物所粉。饱和。214固液比对海带硫酸多糖提取的影响取海
6、带的细胞壁中含有大量的纤维素,加入纤80~100目海带粉、pH为45~50、提取温度维素酶能破坏其细胞结构,有利于多糖物质的溶50、提取时间4h,加酶量为60g/kg,按不同出、分离。但加酶量不宜过多,一方面它会提高的固液比进行提取,测定提取液中多糖的含量,成本,不利于提高产品的竞争力;另一方面由于结果见表4。纤维素酶不是纯酶,其中都含有一些杂酶,因此表4固液比对海带硫酸多糖回收量的影响-1-1在实验中随着加入纤维素酶的增多,杂酶量也增固液比/LkgDW)多糖回收量/gkg干海带多,而杂酶会把溶出物中的可溶性大分子物质降1:304302042解成用乙醇很难沉淀下来的
7、小分子物质,从而使1:404623157多糖回收率下降。1:5056320491:605814103212保温时间对海带硫酸多糖提取的影响取80~100目海带粉、按固液比150(海带与水的质量比)、pH为45~50、提取温度50、由表4可见,固液比越大越好,但由于在实加酶量为60g/kg,在不同的时间下提取,测定际生产中,过大的料液比会增加设备的体积,能提取液中多糖的含量,结果见表2。量的消耗,延长生产周期。虽然能提高产品