色谱分析样品前处理

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1、色谱分析样品前处理样品前处理的意义增加选择性提高灵敏度减少停机概率获得满意的定性定量结果……样品前处理的要求过程简单处理速度快速使用装置要小引进误差要小对目标物有高选择性有较高回收率绿色环保气相色谱常用前处理技术溶剂萃取固相萃取超临界萃取衍生化膜分离蒸馏吸附溶剂萃取索氏提取器常规萃取的两种模式液液萃取：分流漏斗液气萃取（溶液吸收）：对气态、样品蒸汽及气溶胶等中的样品进行吸附蒸馏分类：水蒸汽蒸馏减压蒸馏分馏应用草药中植物油奶产品中有机体氯污染物环境样品中挥发性有机物固相萃取步骤：活化吸附剂反相萃取柱用水溶性有机溶剂正相萃取柱用目标化合物溶剂固相萃取分类正相：萃取极

2、性化合物反相：萃取中等极性到非极性化合物离子交换萃取：吸附带有电荷的化合物萃取柱的选择尽量选择与目标化合物极性相似的吸附剂样品溶剂的强度相对该吸附剂应该较弱固相萃取上样通过抽真空、加压或离心的方法使样品进入吸附剂洗涤和洗脱先用弱溶剂洗干扰物，再用较强的溶剂洗目标化合物也有的将干扰物吸附在柱上而目标物直接流出进行收集固相微萃取（SPE）优点：操作时间短、样品量小、无需萃取溶剂、适于挥发及非挥发性物质、重现性好关键：萃取头涂层选择，其原则是极性涂层适合于极性化合物，非极性涂层适合于非极性化合物固相萃取应用固相萃取主要应用：复杂样品中微量或痕量化合物的分离和富集。如：

3、生物体液，中药物及其代谢产物，食品有效成分或有害成分分析，环保水样中各种污染物的分析气体萃取（顶空技术）分类：静态顶空和动态顶空优点：操作简单可自动化可变条件多灵敏度高衍生化技术优点：将一些物质通过衍生转化为可被色谱测定的物质提高检测灵敏度改变化合物色谱性能，改善分离度衍生化可以帮助进行化合结构签定衍生化技术柱前衍生的应满足的条件：1）反应能迅速、定量的进行，反应重复性好，反应条件不苛刻，容易操作；2）反应的选择性高，最好只与目标化合物反应，即反应的专一性；3）衍生化反应产物只有一种，反应副产物和过量的衍生化试剂应不干扰目标化合物的分离与检测；4）衍生化试剂应方

4、便易得，通用性好。气相色谱中常用的衍生方法硅烷化衍生方法该方法是气相色谱样品中应用最多的方法，它是利用含有活性氢的化合物（如醇、酚、酸、胺、硫醇等）与硅烷化试剂反应，形成硅烷衍生物：R3Si-X+H-R’R3Si-R’+HX硅烷化衍生硅烷化衍生能进行硅烷化的化合物反应活性一般为：醇>酚>羧酸>胺>酰胺，反应活性还受空间位阻的影响，其醇的反应活性为伯醇>仲醇>叔醇，胺的反应活性为：伯胺>仲胺。气相色谱中常用的衍生方法2.酯化衍生方法一般该法用于将热稳定差，挥发弱的有机酸转化为酯。1）三氟化硼催化RCOOH+CH3OH=RCOOCH3+H2O2）重氮甲烷法RCOOH

5、+CH2N2=RCOOCH3+N2（非水介质完成）3）三氟乙酸酐法RCOOH+R’OH=RCOOR’+H2O（本法适合于空间位阻较大有机酸和醇或酚的酯化）气相色谱中常用的衍生方法酰化衍生方法该法能降低羟基、氨基、巯基的极性，改善它们的色谱拖尾，并能提高这些化合物的挥发性，也能增加某些易氧化化合物（儿茶酚胺）的稳定性。ROH(-NH2,SH)+R’COX=ROCOR’+HX衍生化应注意问题1）衍生化完成后，应用干燥氮气吹走挥发性溶剂；2）在使用一些对水敏感的衍生化试剂时一定要对样品和使用的溶剂进行脱水，并在反应过程中避免水汽干扰；3）所用反应容器特别是密封垫片的材

6、料绝对不含目标化合物；4）当生成的衍生产物是易挥发化合物是应采用密封的衍生化容器或低温冷冻装置；5）衍生化完成后应及时进行色谱分析。样品前处理之中药篇常压蒸馏技术样品前处理：将样品直接切碎，常压水蒸汽蒸馏，无水乙醚萃取，旋转挥发除去乙醚，用无水硫酸钠除去水分。色谱条件：非极性柱，小于10℃/min升温至250℃，进样口温度：250℃样品前处理之中药篇微波萃取技术优点：常温强化萃取，不破坏中药材中某些具有热不稳定、易水解或氧化特征的药效成分；时间短，一般10-30min即可获得最佳提取率；适用性广，绝大多数的中药样品均可超声萃取；与溶剂和目标物的性质（极性）关系不

7、大。样品前处理：样品粉碎，蒸馏水浸泡，微波加热，水蒸汽蒸馏法提取，经无水硫酸钠干燥后检测色谱条件：弱极性柱，小于10℃/min升温速率，终止温度250℃。样品前处理之中药篇超临界液体萃取技术（SFE）优势：传质速度快、渗透能力强、溶解萃取效率高、可在室温提取热敏性成分、绿色环保。适用范围：挥发油、小分子萜类、部分生物碱；通过添加夹带剂如甲醇、丙酮等增加压力，可改善流体性质，对中药生物碱、黄酮类、皂甙类等非挥发性有效成分的提取也日趋普遍。样品前处理之中药篇固相微萃取技术（SPE）优点：无需有机溶剂，操作简便；易于自动操作；有很好的方法准确度和重现性。类型：直接萃取

8、法：萃取纤维直接暴露在样