《高速逆流色谱》PPT课件

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1、高速逆流色谱一、概述高速逆流色谱（High-SpeedCountercurrentChromatography,HSCCC）是一种连续高效的液-液分配色谱分离技术。该技术不需要固体支撑体，主要依据物质在两相中分配系数的不同对物质进行分离，相对其他常用色谱（如柱色谱、高效液相色谱等）来说，具有无不可逆吸附和回收率高的特点，特别适合于天然活性成分的分离。HSCCC技术最早是由美国国立卫生院Ito博士研制应用，我国对HSCCC技术应用较早，HSCCC技术发展十分迅速，在过去20~30年中，出现了一系列新型的分离技术

2、，积累了大量的科研成果，自1995年以来，国外已有5本英文专著出版，我国目前也有两本中文专著出版。二、HSCCC色谱工作原理HSCCC色谱包括储液罐、泵、螺旋管分离柱、检测器、色谱工作站或数据采集软件或记录仪以及馏分收集器等部分。选择溶剂体系平衡选择固定相充满螺旋管柱高速旋转螺旋管泵入流动相流动相流出，注入待分离的样品收集馏分分离效果溶剂系统固定相流动相洗脱方式、流动相的流速仪器的旋转方向和转速样品浓度和进样方式柱温等检测器紫外-可见光检测器蒸发光散射检测器质谱检测器等http://video.sina.co

3、m.cn/v/b/18615566-1585286663.htmlhttp://video.sina.com.cn/v/b/18605037-1585286663.html与其它色谱分离技术相比，高速逆流色谱具有如下特点：分离效率高制备量大操作灵活回收率高应用范围广分离成本低三、溶剂体系的要求1溶剂体系的种类弱极性溶剂体系中等极性溶剂体系强极性溶剂体系两相由正己烷和水组成，可用甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂系统的极性。典型的溶剂体系有：正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水中等极性溶剂体系的两

4、相由氯仿和水组成，可以加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂系统的极性。适合于黄酮类、蒽醌类、香豆素和一些极性较大的木脂素和萜类的分离。典型的溶剂体系是氯仿-甲醇-水（4：3：2）强极性溶剂体系的两相基本物质是正丁醇和水，可以加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等溶剂来调节溶剂系统的极性，也可以在氯仿水体系中调节pH值来增大极性,或在异丁基甲醚水体系中加入适量的酸和碱.适合于极性很强的生物碱类化合物的分离。典型的溶剂体系:氯仿-甲醇-HCl异丁基甲醚-水（有机相加三乙胺，水相加盐酸）2溶剂体系选择的步骤（1）预测要分离物质

5、的极性，粗选一个溶剂体系；（2）取少量样品于上下相各2毫升的溶剂体系中，用TLC进行检验，可加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂体系的极性，直到样品在上下相中的分配比K为0.5~2为止；（3）用HPLC测定K值；（4）用分析型HSCCC进行预分离，再用制备型高速逆流色谱进行分离。（1）溶剂不造成样品的分解或变性；（2）样品在溶剂中有足够高的溶解度；（3）样品在溶剂系统中有合适的分配系数值；（固定相为管柱总体积的50%以上，分配系数为0.5~2）（4）固定相能实现足够高的保留。3选择溶剂时应注意生物碱氯仿-甲醇

6、-NaH2PO4溶液(pH=4)溶剂体系氯仿-甲醇-盐酸体系异丁基甲醚-四氢呋喃-水体系异丁基甲醚-水体系正己烷-乙醇-水体系正己烷-醋酸乙酯-水正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水4不同物质的溶剂体系黄酮类化合物正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水正丁醇-醋酸乙酯-水氯仿-甲醇-水正己烷-醋酸乙酯-正丁醇-甲醇-醋酸-水正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水萜类异辛烷-乙酸乙酯-甲醇-水异辛烷-甲醇-水氯仿-甲醇-水木脂素和香豆素氯仿-甲醇-水正己烷-乙睛-醋酸乙酯-水正己烷-甲醇-水氯仿-甲醇-水四、应用溶剂系统两相溶剂系统：正己烷-乙

7、酸乙酯-乙醇-水（6：3：2：5），在分液漏斗中充分混合，临用前将其分开。分离条件：室温下，上相为固定相，下相为流动相，流速为0.7ml/min；洗脱方式：由首端向尾端洗脱；主机：正转，流速为800r/min进样:3.8mg/2ml；检测：紫外检测器，波长为220nm实验结束时,用N2将固定相由首端向尾端推出,分别收集四份,色谱柱管用甲醇清洗两次.