高速逆流色谱.PPT

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1、高速逆流色谱High-SpeedCounter-CurrentChromatography一.发展史1941年级联链型萃取装置1944年非连续式逆流分溶装置CCD1960年高效连续混合分层装置缺点设备庞大复杂溶剂易乳化溶剂耗量大分离样品有局限性70年代YoichiroIto互不相溶的两相溶剂螺旋形的小孔径管子—分段割据——两溶剂相之间的逆向对流特点：不存在固态载体样品处理量大采用较广泛的溶剂系统二.逆流分溶CCD液-液分配原理：溶质分配系数在互相饱和的两相溶剂中为常数CⅠ上相CⅡ下相经8次操作后，各试管中溶质分配结果如图：A:K=1,B:K=3,C:

2、K=0.33三.螺旋管逆流色谱技术原理螺旋管逆流色谱的基础是螺旋管内溶剂相的特殊分布状态和特征1.流体静力平衡体系HSES（Hydrostaticsequilibriumsystem）每个分配单元保留了约50%固定相。流动的移动相造成了二相的不断混合二相间分配2.流体动力平衡体系HDES（Hydrodynamicsequilibriumsystem）与HSES相比，其差别是螺旋管有一自转运动两种基本逆流色谱体系比较项目HSESHDES螺旋管运动静止绕自身轴线运动功能的对称性对称不对称移动相洗脱方向从任一端引入只能从引入端分配效率较低较高固定相保留值接

3、近50%转速、两相界面张力有关两相界面面积较小较大两相混合作用缓和强烈有效管柱空间50%100%四.高速逆流色谱HSCCC利用单向性流体动力平衡实现移动相高速时稳定的固定相保留（一）单向性流体动力平衡逆流色谱在基本HDES体系中，移动相流速↑，固定相的流失↑，分离组分峰形的分辨率↓。螺旋管的转速加快达到临界范围时，两相会沿螺旋管长度完全分开单向性流体动力平衡体系可按二种方式实现逆流色谱：以首端相为固定相，从首端泵入尾端相以尾端相为固定相，从尾端泵入首端相固定相的保留是在两个力的平衡状态下实现的阿基米德螺线力——固定相移向移动相引入端流动相的推力——固

4、定相推向移动相流出端（二）溶剂系统中两相在转动管柱里的流体动力学分布.保留情况（多层螺旋管）氯仿—醋酸—水（2：2：1）规定：以顺时针方向转动时，在多层螺旋管内：靠心端——首，外围端——尾固定相保留值（%）流通方式上相为移动相下相为移动相HT—78.78TH70..70—H-首端T-尾端获得高保留值的条件是：对上述体系，以下相为移动相，由首尾洗脱以上相为移动相时，由尾首洗脱（三）实验步骤1.流程及步骤溶剂输液泵主机检测器记录仪进样器调速器操作步骤：两相溶剂混合用固定相注满管柱移动相泵入首端当尾端出现移动相时，对检测器和记录仪调零，走基线进样，收集2.

5、两相溶剂系统的选择参考文献测定分配系数，一般K最佳范围为0.5-2，允许0.2-5用薄层色谱法或纸色谱预分溶剂系统选择原则：不造成样品的分解或变性溶解度及分配系数固定相的高保留分离效果3.仪器运行参数的确定螺旋单元数螺旋管内径离心力管柱材质：聚四氯乙烯转速流速4.样品溶液的制备及进样量(1)样品溶液的选择(2)样品量HSCCC法的特点不需载体溶剂系统的选择可较广对样品前处理要求较低，样品处理量较大（mg）