中药“龙泉复方”制剂有效部位群抑制肿瘤作用的机制研究

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1、中南民族大学硕士学位论文中药“龙泉复方”制剂有效部位群抑制肿瘤作用的机制研究姓名：邓志芳申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：张惟杰;李劲2011-05-27摘要本研究旨在探询人基质金属蛋白酶3（MatrixMetalloproteinase3，MMP3）基因单核苷酸多态性与食管鳞癌易感性的关联关系。选择MMP3基因上游转录调控区—774位的rs522616(A/G)，—1380位的rs632478(A/C)，—1552位的rs494963(T/G)，3个SNP位点为研究对象。利用蛋白酶K法提取外周血基因组DNA；采用PCR-RFLP的方法对外周血标本各个

2、位点进行基因分型，分别对河南食管癌散发病例、湖北食管癌散发病例以及两地正常人、河南高发区移民的不同人群组合做病例-对照分析。运用SPSS软件对基因分型结果进行数据统计分析。（1）位于—774的rs522616（A/G）等位基因有GG、GA、AA三种分型，湖北正常人群与河南散发人群在GG基因型频率上有差异（0.01

3、与河南散发患者在AG基因型频率上有差异（0.01

4、3基因上游转录调控区rs522616、rs632478、rs494963的单核苷多态性与人群食管鳞癌的遗传易感性有明显相关。关键词：MMP3；转录调控区；单核苷酸多态性；食管鳞癌；遗传易感关联分析；中南民族大学硕士学位论文摘要探寻中药“龙泉复方”对不同肿瘤细胞作用的最适配伍及其用药浓度。通过MTT(四甲基偶氮唑盐)法绘制细胞增殖曲线观察药物对肝癌细胞系HepG-2和食管鳞癌细胞系EC-1、EC-109细胞增殖的影响，用荧光染色法进一步确定“龙泉复方”有效成分诱导细胞凋亡的较佳配伍及其有效作用浓度范围。结果表明：能抑制HepG-2细胞增殖的有效作用范围的七味单方(分别是马钱

5、子、山慈菇、喜树果、龙葵、石上柏、青黛、紫菀)浸膏混合物的浓度范围是500~1000µg/ml，然而，在125~250µg/ml之间却促进细胞增殖，龙葵和七味药物复方总浸膏作用范围为<1000µg/ml；对抑制EC-1细胞而言在浓度范围内均对细胞有抑制作用，三味药物混合浸膏(马钱子，喜树果、青黛提取的浸膏的混合物)<50µg/ml和150~400µg/ml有明显效果，七味药物复方总浸膏<25µg/ml和50~200µg/ml有明显效果，喜树果单方浸膏有效范围为25µg/ml和50~200µg/ml之间；3种浸膏促进EC-1细胞增殖的浓度范围依次为：50~100µg/ml，

6、25~50µg/ml和25~50µg/ml；对于EC-109细胞而言在浓度范围内均对细胞有抑制作用，龙葵、山慈菇和马钱子对细胞的明显抑制浓度分别为：15~100µg/ml、25~50µg/ml和<50µg/ml；通过对EC-1荧光染色的观察发现诱导细胞凋亡的有效作用浓度范围分别为：七位单方浸膏混合物为5~10µg/ml，三味药复方混合浸膏为10~25µg/ml，喜树果约50µg/ml；通过对凋亡蛋白Caspase-3的检测表明不同的药物浓度下细胞蛋白的表达量不同，并在一定的区间内呈现线性关系。上述配伍在所示用药浓度范围对癌细胞增殖有明显抑制作用，但对于不同的癌症细胞系，其

7、较佳作用的复方配伍和浓度也不尽相同，个别药物浓度甚至作用相反。研究结果提示，在临床中应根据具体情况调整，使得用药少效果佳。关键词龙泉复方;配伍;药物浓度;肿瘤细胞;MTT(四甲基偶氮唑盐)法;AO/EB染色法0AbstractToinvestigatethegeneticassociationbetweensinglenucleotidepolymorphismofmatrixmetalloproteinase3geneandesophagealcancersusceptibility,threeSNPswithinupstr