应用细菌纤维素膜构建组织工程角膜基质的实验分析

《应用细菌纤维素膜构建组织工程角膜基质的实验分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、天津医科大学硕士学位论文中文摘要研究目的角膜病是主要的致盲眼病之一，进行角膜移植术是最有效的治疗途径，但存在着植片供体不足，移植排斥等问题。组织工程角膜的相关研究为解决角膜移植关于植片供体不足的问题提供了新的途径。本文的研究目的是体外构建组织工程角膜基质，观察角膜上皮细胞和角膜基质细胞在细菌纤维素膜上的生长情况，观察细菌纤维素膜的生物相容性；并通过体内动物实验观察细菌纤维素膜的透明性及生物相容性，为组织工程角膜基质支架材料的选择提供实验依据。方法1、分离兔角膜上皮细胞和兔角膜基质细胞进行原代培养，应用CK-3和Vimentin试剂盒进行细胞鉴定并在显微镜下观

2、察其生长情况。2、分别将兔角膜上皮细胞和兔角膜基质细胞接种到细菌纤维素膜（BC）上，构建组织工程角膜上皮和组织工程角膜基质，并利用LIVE-DEAD细胞活性毒性检测试剂盒检测细胞活性。3、应用扫描电镜和透射电镜观察兔角膜基质细胞在BC膜上的生长情况，应用扫描电镜观察兔角膜上皮细胞在BC膜上的生长情况，观察BC膜的生物相容性。4、构建兔角膜基质囊袋模型，将BC膜植入囊袋内，对照组仅构建角膜基质囊袋模型。术后1天、1周、1个月、3个月用裂隙灯观察移植情况并拍照。5、术后1周、1个月、3个月取兔角膜，进行病理切片检查，HE染色，检测移植后炎症反应情况。结果1、成功

3、分离培养兔角膜上皮细胞和兔角膜基质细胞，细胞鉴定结果为阳性，表I万方数据天津医科大学硕士学位论文明该细胞为角膜上皮细胞和角膜基质细胞。2、细胞活性毒性检测结果显示兔角膜上皮细胞和兔角膜基质细胞在BC膜上能够存活，且存活率基本达100%，BC膜无细胞毒性。3、扫描电镜和透射电镜检查的结果表明兔角膜基质细胞在BC膜上生长状态良好，细胞活跃，细胞与BC膜连接紧密，BC膜生物相容性良好，应用扫描电镜检查的结果显示兔角膜上皮细胞在BC膜上生长状态良好。4、成功构建兔角膜基质囊袋模型，裂隙灯观察显示植片透明，无明显炎症反应。5、HE染色结果显示BC膜与周围组织无明显间隔

4、，与周围组织相互融合，无明显炎症细胞浸润。结论体外实验证明兔角膜上皮细胞和兔角膜基质细胞在BC膜上生长状态良好，BC膜无明显细胞毒性，生物相容性良好，体内实验也证明BC膜的生物相容性好，可作为构建组织工程角膜基质的新型生物学材料。关键字：角膜上皮细胞角膜基质细胞生物相容性细菌纤维素膜组织工程角膜基质II万方数据天津医科大学硕士学位论文AbstractBackgroundCornealdiseaseisamajorcauseofblindness.Cornealtransplantationisthemosteffectivewaytotreat,butthe

5、rearenotenoughdonorsforgraftand,transplantrejectionandotherissues.Corneatissueengineeringresearchprovidesanewwaytosolveshortageofcornealtransplantationforgraftdonor.Toevaluatethebiocompatibilityofbacterialcellulose(BC)membraneinvitro,weculturedrabbitcornealepithelialcellsandrabbitc

6、ornealstromalcellsonBCmembraneandobservedthegrowthofcornealepithelialcellsandcornealstromacells.Toprovidetheexperimentalbasisfortheclinicalapplicationofcornealtissueengineering,thetransparencyofbacterialcelluloseandbiocompatibilitywereobservedthroughtheanimalexperimentsinvivo.Metho

7、d1.Rabbitcornealepithelialcellsandrabbitcornealstromalcellswereisolatedandculturedontheplate.WeidentifiedthemwithCK-3kitandVimentinkitandobservedtheirgrowthunderthemicroscope.2.Therabbitepithelialcellsandcornealstromalcellswereseededonthebacterialcellulosemembrane(BC)toconstructthe

8、tissueengineeringcornealep