多奈哌齐拮抗β淀粉样蛋白抑制海马神经元烟碱乙酰胆碱β2受体表达的作用

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1、第四军医大学硕士学位论文A卜1PAPCI2ERKMAPKDHSOPBSBSAMTTPKCADMEM-F12PLLLSC卜1Alpha··amino·-3·-hydroxy·-5-methyliSOxazOIeprOpiOnateRatPheochromocytomaExtracellularsignaI—reguIat—edkinaseMitogen—activatedproteinkinaseDimethyIsulfoxidePhosphatebuflersalineBovineserumalbumin3-(4，5-Dimethylthiazol一2一y1)一2，5-

2、diphenyltetrasoliumBromideProteinkinaseCAbsorbenceDUIbecco’SmodifiedeagIemedium：一nutrientmixturemediumPoly—L-LysineIaserscanningConfocalmicroscopy2a一氨基羟甲基恶唑丙酸大鼠嗜铬细胞瘤细胞细胞外信号调节激酶胞外信号调节激酶二甲基亚砜磷酸盐缓冲液牛血清白蛋白噻唑蓝蛋白激酶C吸光度DMEM-F12培养液多聚赖氨酸激光扫描共聚焦显微镜第四军医大学硕士学位论文多奈哌齐拮抗13淀粉样蛋白抑制海马神经元乙酰胆碱B2烟碱受体表达的作用研究生

3、：杨荣军导师：万琪教授(主任医师)第四军医大学西京医院神经内科，西安710032中文摘要阿尔茨海默病(Alzheimer'sDisease，AD)是发生于老年人群的一种原发性退行性脑病，大于65岁人群的发病率为5％一10％，其确切病因迄今不明。对其发病机制曾先后提出有B淀粉样蛋白学说、胆碱能学说及基因学说等假说，其中IS淀粉样蛋白学说日益受到较多学者的认同。AD患者脑内主要病理表现为弥漫性大脑皮质萎缩，大量神经细胞变性丧失，以基底前脑和海马新皮层胆碱能神经元最严重，神经组织内可见许多老年斑和神经原纤维缠结。B淀粉样蛋白(amyloidbetaprotein，A13)是构

4、成老年斑的主要成分，其中ALB25-35是活性片段。烟碱乙酰胆碱受体(nicotinicacetylcholinereceptor,nAChRs)属于一个配体门控通道家族，研究发现nAChRs与脑内许多重要功能相关，包括认知和记忆功能。在AD的尸检及体外实验研究中有nAChRs减少的现象。盐酸多奈哌齐是近年来应用于临床的一种新型可逆性胆碱酯酶抑制剂，用于治疗轻中度AD，国内外报道其具有一定疗效。研究发现：多奈哌齐药理作用复杂多样，除抑制胆碱酯酶作用外，还可能具有减轻自由基损伤、改善脑血流量、拮抗脑内N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体等作用，在体外实验中发现它也可能作

5、为nAChRs的变构调节剂，可能以某种途径直接作用于nAChRs而实施它的神经保护作用。本实验观察多奈哌齐对AB损伤神经元beta2烟碱型乙酰胆碱受体(Beta2nicotinicacetylcholinereceptor,第四军医大学颈士学位论文132一nAChR)表达的变化。以期为稿床上治疗AD寻找新的药物靶点提供一些实验依据。基的：观察A1325—35对海岛神经元的损伤，及神经元上烟碱型乙酰胆碱受体B2亚单位表达的变化，并观察用多奈哌齐预处理对上述变化的影响。方法：篇一部分：粥币同浓度(1、S、10、201Jmol／L)的AB25．35诱导原代培养的海玛神经元损伤

6、，用倒置显微镜及M丌法观察神经元形态及存活的变化；雳免疫荧光法鼹察毒孛经元上栝记戆132-nAChR瓣表达鲍交纯，著翅激光援攒共聚焦照微镜进行半定量。第二部分：不问浓度及不同时间多奈哌齐提前干预培养的海马神经冗，之蜃鼹A多2s。35诱导毒孛经元损伤。逶过餐置显皴锾戏察耱经元戆形态学改变，用MT丫法测量神经元的活性的变化。用免疫荧光法观察不f司浓度和不同时间的多奈嘁齐干预后A132s．35损伤神经元上132-nAChR表达的情况，并用免疫荧光讫学缭会激竞据援装聚焦显擞镶拳定量法溅爨糖经元上彝2一nAChR平魏荧光强度的变化。结果：实验瓣餐一嫠分：A瑟2s．35携移暴筏壤莽

7、黪海骂襻经元撰爨夔豢护终建及神经元土132一nAChR的表达。结果发现：各处理组的神经元形态上有不同程度地受损寝现；各处理缀的A值较对照组减小，神经元上标记的f12一nAChRl约平均荧跫强发鞍对照缀减，J、，显疆A1325，35浓度增大毒交小趋势。实验的第二部分：观察多奈赈齐预处理对A132s．35诱导原代培养的海马神经元损伤的保护作用及神经元上132-nAChR的表达。结果发现；提前用不间浓度嚣多祭鞭齐予{燹§≥够减轻A1％s．35对耱羟元懿攒臻。免疫荧蹩纯学法表秘多奈哌齐预处理组的神缀元上132一nAChR表达明显增加，结合激光扫描