原花青素值的测定

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1、3．1原花青素值的测定原花青素值的测定采用Bates—smith法和Poaer法。原理：原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素，而儿茶素、表儿茶素等黄烷一3一醇单体没有此反应(图2)。它们测出的结果是原花青素的相对含量，分别用原花青素指数和PVU表示，是根据经验公式求得的。葡萄籽提取物中的原花青素指数一般在80～100之间，PVU一般在250～350之间。原花青素值只是相对含量，并非原花青素的真实含量。据调查，同为原花青素值95的产品，多酚含量相差15％，质量大相径庭四。很多生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素

2、的百分含量是错误的。3．2原花青素含量的测定原花青素的含量测定方法很多，也比较混乱。常用的有以下几种方法。3．2．1铁盐催化法此方法的反应原理与原花青素值测定原理相同，在计算原花青素的含量时使用了原花青素标准品。Fe¨、盐酸为常用的催化剂和酸解剂。由于水、乙醇为反应介质时吸光值很低，一般采用正丁醇为反应介质【15-161。通常的具体操作：取1．0mL样液(或原花青素溶液)于10mL刻度试管中，加入6．0mL正丁醇一浓盐酸(95：5)与2％硫酸铁铵溶液(溶解于2mol／L盐酸)0．2mL，混匀，置于沸水浴中加热40min后，立即取出

3、用冰水快速冷却至室温，在550Nm处测定吸光值。此方法较简便，而且对原花青素的选择性反应较好。铁盐催化法对反应体系中的含水量和Fe浓度要求比较严格，一般要求含水量6％，Fe浓度4．5x10％，而且过高的Fe¨浓度对反应没有影响【l51。傅武胜【l61研究表明3％～4％为合适的含水量，Fe浓度选择在9．OxlO％左右。但是也有学者总结分析2％～6％含水量对花青素的形成有抑制作用，稍高的Fe¨浓度(>15g／L)也抑制花青素的生成.在铁盐催化反应的基础上，杨大进【lI等人利用高效液相色谱法检测了原花青素含量。该方法将原花青素在上述铁盐

4、催化条件下生成的深红色花青素离子进行高效液相色谱分析，从而确定原花青素的含量。此方法能够排除部分杂质的影响，具有定性定量准确的优点。3．2．2香草醛法测定原理：原花青素和儿茶素类单体的A环的化学活性较高，在酸性条件下，其上的问苯二酚或间苯三酚与香草醛发生缩和，产物在浓酸作用下形成红色的正碳离子，样品的浓度与产生的颜色呈正相关，在500llm波长下测定其吸收光值香草醛法测定时，一般以儿茶素为标准物，以甲醇为溶剂。盐酸、硫酸均可作为反应过程的催化剂，但在使用硫酸时，浓度不易过高，过高的硫酸易使香草醛发生自缩合反应和氧化分解。具体的操作

5、方式较多：1mL试液+2．5mL1％香草醛甲醇溶液+2．5mL25％硫酸或8％盐酸(均溶解于甲醇)，30。【二下反应15min～20min【2l。丑；1mL试液+6mL4％香草醛甲醇溶液+3mL浓盐酸，室温下反应15minL231；有的更是在2O℃下反应15h[241。操作方式差别较大，不利于使用者的选择，有待于统一。3．2_3紫外分光光度法原花青素为无色物质，在可见光区无特征吸收峰，在紫外区有唯一特征吸收峰，最大吸收波长在280Nm处。尽管此方法简单快捷，但是此方法只适用于原花青素含量纯度特别高的产品，不适合一般原料中原花青素的

6、检测。这是因为儿茶素类在280Nm处也有最大吸收，V、Vc、Ve。、Ve、芦丁、B一胡萝卜素等物质在此波长处都有明显的吸收.3．2．4Folin—Ciocaheau与HPLC结合法此方法为美国葡萄籽方法评定委员会推荐使用的方法。Folin—Ciocaheau法测定的是多酚含量，一般以没食子酸为对照物。在碱性溶液中，多酚可以将钨钼酸还原，生成蓝色的化合物，在760Nm处有最大吸收。葡萄籽提取物中的多酚含量一般在75％～95％之间。利用HPLC测定没食子酸、儿茶素、表儿茶素、表儿茶素没食子酸酯四种单体的含量来代表单体的总量。这是因为它

7、们四种单体的含量占到了葡萄籽提取物中单体含量的90．0％以上。原花青素的含量则为多酚含量与单体含量相减之差。此方法缺点是蛋白质、氨基酸、核酸、抗坏血酸等易被氧化的物质也参与Folin—Ciocalteau反应。同时由于葡萄籽提取物中没食子酸含量甚微(0％～1．2％)，与儿茶素(1．5％～7．3％)和表儿茶素(2．0％～5．1％)含量相差悬殊四，原花青素含量用没食子酸量来表示缺乏代表性。3．2．5钼酸铵分光光度法它是基于邻苯二酚与钼酸铵在弱酸性介质中生成黄色钼酸酯，反应产物在333nm波长处具有最大吸收。马亚军寸检测条件进行了简单摸

8、索：取0．08mol，L钼酸铵1mL溶液置于25mL比色管，加人适量试液，用1．OxlOmol／L盐酸冲至刻度，反应瞬间完成。根据反应原理，花色素、没食子酸、儿茶素类都具有邻苯二酚结构，也参与钼酸酯的生成，测定原花青素的选择性不高，受到杂质影响较大