溶菌酶检验标准

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1、1术语和定义溶菌酶酶活性单位：在25℃、pH值为6.2的条件下，于450nm处每分钟引起溶酶小球菌体（MicrococcusLysodeiktidus）溶液吸光度下降0.001所需要的酶量为一个酶活性单位U。本定义适合“比浊法”。溶菌酶效价：溶菌酶在一定浓度范围内，其对数计量与抑菌圈直径（面积）呈对数关系，通过检测其对微生物的抑制作用，比较标准品与样品产生抑菌圈的大小，计算出样品的效价，单位为u。本定义适合“管碟法”。2技术要求2.1外观和性状要求粉酶为白色或微黄色的结晶或无定形粉末。2.2技术指标4.2.1粉酶水分含量：≤12%。4.2.2粉酶粒度：42

2、0μm孔径分析筛筛上物≤4%。4.2.3粉酶炽灼残渣：≤10.0%。4.2.4酶活（效价）指标表1产品成分分析保证值项目指标粉状50型溶菌酶酶活性（效价），≥U/g（u）5000004.2.5卫生指标符合GB13078和NY/T722的有关规定。3试验方法本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的三级水，所用试液中的标准溶液，在没有注明其他要求时均要求按GB/T601，GB/T602制备。3.1外观的测定取样品少许放入烧杯，下衬白纸进行目测。3.2粉酶水分的测定按GB/T6435规定进行检测。3.3粉酶粒度的测定按G

3、B/T5917规定进行检测。3.4粉酶炽灼残渣的测定按《中国兽药典》规定进行检测。1.1卫生指标的测定按饲料卫生标准GB13078和NY/T722规定的方法进行。1.2溶菌酶酶活性（效价）的测定溶菌酶微生物测定法系在适宜条件下，通过检测溶菌酶对微生物的抑制作用，计算出溶菌酶活性（效价）的方法。依据试验设计原理不同，可分为比浊法和琼脂扩散法（即管碟法）。1.2.1试剂和溶液5.6.1.1溶酶小球菌（MicrococcusLysodeiktidus）将溶酶小球菌接种于固体培养基上，置37℃培养48小时，用无菌水将菌体洗下，用纱布滤过，滤液离心后，倾去上层清液，

4、用水洗涤菌体数次，然后用少量水悬浮，冰冻干燥，得淡黄色粉末，供测定用，保存一年。使用时，在营养琼脂斜面上活化，传代培养，工作用菌种不超过5代，斜面菌种从培养好到使用时间，最长不超过2个月。并将培养好的斜面菌种，放置4℃冰箱保存。制备的菌悬液可以使用一周，不用时放置4℃冰箱保存。5.6.1.2磷酸缓冲液称取磷酸二氢钠（NaH2PO4.2H2O）11.7g,磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O）7.86g，加900mL水溶解,调pH值至6.2，定容至1000mL。5.6.1.310％氢氧化钠溶液5.6.1.41％硫酸铜溶液5.6.1.530%三氯醋酸5.6.

5、1.6斜面培养基：营养琼脂5.6.1.7抗生素检定培养基II号5.6.1.8溶菌酶标准品1.2.2仪器5.6.2.1分析天平：精密度0.1mg；5.6.2.2牛津杯：牛津杯内径6.0±0.1mm，外径7.8±0.1mm，高10.0±0.1mm，每套牛津杯的重量差异不超过±0.05g，内外壁及两端面光滑平坦。管壁厚薄一致；5.6.2.3陶瓦盖：内径约103mm，外径108mm,平坦，吸水性强。应定期清洗、干燥或干热灭菌；5.6.2.4游标卡尺：精度0.02mm；5.6.2.5双碟：内径约90mm，外径16mm～17mm的硬质玻璃或塑料培养平皿，碟底厚薄均匀，

6、水平透明，无色斑气泡；5.6.2.1超净工作台：有效工作面局部洁净度100级。用于试验菌的接种传代或菌悬液制备；5.6.2.2pH酸度计：精确到0.01；5.6.2.3分光光度计：配10mm比色皿，可在450nm下测定吸光值；5.6.2.4离心机：转速为4000r/min以上；5.6.2.5秒表：每小时误差不超过5s；5.6.2.6恒温培养箱：设置漂移温度为35℃～37℃；5.6.2.7高压灭菌锅5.6.2.8烘箱5.6.2.9其它玻璃器皿：刻度吸管:1mL，2mL，5mL，10mL，25mL无菌吸管等；1.1.1试验方法5.6.3.1鉴别固体样品：取本品

7、10mg，溶于1mL水中，加30%三氯醋酸2滴，产生白色沉淀。取试管一支，加5%溶菌酶水溶液2滴、10%氢氧化钠5滴及1%硫酸铜溶液1滴，混匀后，应显紫玫瑰色。5.6.3.2方法一：比浊法特定浓度的溶酶小球菌悬浮液在450nm条件下存在一定吸光度，溶酶菌作用于溶酶小球菌底物会引起吸光度降低，通过计算指定时间内吸光度降低的幅度可以计算出溶菌酶的活力。①试验步骤：精确称取样品（液体样品需在离心机上以3500r/min离心10min后取上清液）不少于20mg，用pH6.2的0.1mol/L磷酸缓冲液稀释到酶活单位为100U/mL~200U/mL，备用。将保存好的

8、溶酶小球菌在营养琼脂斜面上活化，传代两次后的菌体37℃培养48小时