溶菌酶活性测定方法的改进及其在重组人溶菌酶质量标准建立中的应用-论文.pdf

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1、第33卷第8期分析测试学报V01．33No．82014年8月FENXICESHIXUEBAO(JoumalofInstrumentalAnalysis)917～921doi：10．3969／j．issn．1004—4957．2014．08．010溶菌酶活性测定方法的改进及其在重组人溶茵酶质量标准建立中的应用宋纯艳一，张拓，侯利平。，原剑。，黄亚娟。，韩治国，刘曙晨，甄蓓'孙，魏开华，(1．中南大学药学院，湖南长沙410013；2．军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京100850；3．北京蛋白质组研究中心，蛋白质组学国家重点

2、实验室，国家蛋白质科学中心(北京)，北京102206；4．北京正旦国际科技有限责任公司，北京102206)摘要：获得一种趋于均相反应体系的比浊法，用于重组人溶菌酶活性的研究，并建立相关操作规程和质量标准。通过显微计数法进行底物菌液质控，改进酶与菌液的混合方式和最佳酶用量，采用“双直线法”优化反应计时区间，并精确测定重组人溶菌酶含量。显微镜菌体计数法确定0．3mg／mL底物菌液中菌体数保持在1．1X10个／mL左右；酶与菌液在样品池内经吸排法快速混合可趋近均相体系；酶的最佳用量为3g；确定反应计时区间为0—60S；依据所制定的酶

3、活性操作规程，确定重组人溶菌酶活性质量标准为45ooo一6500oU／mg，日内、日间相对标准偏差均小于5％；优选Lowry法并精确测定蛋白含量为(1．0±0．1)mg／mL。改进后的方法稳定性得到明显提高，且操作简便、结果可靠，已被3家研究单位、企业验证并接受。建立的重组人溶菌酶活性和含量测定质量标准及操作规程具有实际参考价值。关键词：重组人溶菌酶；比浊法；双直线法；Lowry法中图分类号：0657．3；0629．8文献标识码：A文章编号：1004—4957(2014)08—0917—06ImprovementofLysoz

4、ymeActivityDeterminationMethodandItsApplicationinRecombinantHumanLysozymeQualityStandardEstablishmentSONGChun．yan，ZHANGTuo，HOULi—ping，YUANJian，HUANGYa-juan。，HANZhi．guo，．LIUShu—chen，ZHENPei，，WEIKai．hua，(1．SchoolofPharmaceuticalScience，CentralSouthUniversity，Changsha4

5、10013，China；2．InstituteofRadiationMedicine，AcademyofMilitaryMedicalScience，Beijing100850，China；3．BeijingProteomicsResearchCenter，StateKeyLaboratoryofProteomics，NationalCenterforProteinScienceBering，Beijing102206，China；4．BeijingC&NInternationalSci—Tech．Co．，Ltd．，Beiji

6、ng102206，China)Abstract：Aturbidimetricmethodwhichcouldvergeonahomogeneousreactionsystemwasob-tained．Themethodwasappliedinstudyofrecombinanthumanlysozymeactivity，andtherelatedoperationproceduresandqualitystandardswereestablished．Inthisresearch，microscopiccountingmeth

7、odwasusedforthequalitycontrolofsubstratebacterialiquid．Themixingmannerofenzymeandbacterialiquidwasimproved，SOastheamountofenzymeusedfordetection．“Doublelinemethod”wasadoptedtooptimizethereactiontimeintervalforactivitydetection．Also，thecontentofrecombinanthumanlysozy

8、mewasdetectedaccurately．Bymeansofmicroscopecountmethod，thebacterianumberinreactionsubstratewaskeptatabout1．1×10／mL．andtheconcentrationofth