溶菌酶提取实验

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1、鸡蛋中溶菌酶的提取，纯化及纯度鉴定李莹姝蒋华云*(南京师范大学生命科学学院，南京210046)摘要：从蛋清中用724弱酸性阳离了交换树脂提取溶菌酶，然后用硫酸钱溶液洗脱，盐析得到溶菌酶。用葡聚糖凝胶层析(SephadexG-75)纯化溶菌酶，收集峰值处样品。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳鉴定个步骤留样及所得溶菌酶样品的纯度。溶菌酶得率为0.0474mg/100ml(0.03g/kg)；葡聚糖凝胶层析过程纯化样詁得到了洗脱峰曲线，但未能收集到峰值处样品；电泳结果显示在纯化过程中溶菌酶纯度不断升高。本实验溶菌酶得率较低，提取工

2、艺有待改进，需进一步减少样品损失；层析过程需进一步熟练掌握，以更好达到纯化效果。关键词：溶菌酶；离子交换树脂，凝胶层析；SDS-PAGEExtraction,purificationandpurityofEgglysozymeYingsLiHuayJiang*(CollegeofLifeScience，NanjingNormalUniversity，Nanjing210046,China)Abstract:Fromeggwhite,with724weakacidcationexchangercsinextractionoflysozyme,

3、andthenelutedwithmumoniumsulfate,saltingtobelysozyme.Withdextrangelchromatography(SephadcxG-75)purifiedlysozyme,thepeakofthesamplecollection.BySDS-polyacrylamiclegel(SDS-PAGE)electrophoresisandidentifiedstepstostaykindofpurityofthesamplesfromlysozyme.Lysozymeyield0.0474mg/

4、100ml(0.03g/kg);dextrangelchromatographypurifiedsamplesobtainedduringelutionpeakcurve,butfailedtocollectsamplesatthepeak;electrophoresisshowedthatthepurificationprocessof1ysozymeenzymepurityrising.Inthisstudy,lysozymewasthelowrateofcxtractionprocesscouldbeimproved,theneedt

5、ofurtherreducesamplelosses;chromatographyprocessneedsfurtherproficiencyinordertobetterachievepurification.溶菌酶(Lysozyme,1,4—B—N—溶菌酶)是一种专门作用于革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的P-1,4-糖甘键的水解酶，因而乂称为胞壁质酶或者N-胞琏质聚糖水解酶。溶菌酶在临床上是有效的消炎剂，在食品防腐和基凶工程等方面也有广泛的应用。⑴⑵溶菌酶来源广泛，人、动物、植物和微生物中均有发现，其中鸡蛋清中含量较高，因此，工业生产溶菌酶

6、常以鸡。蛋清为原料鸡蛋清的溶菌酶是研究得最清楚的一种溶菌酶叫其化学性质稳定，纯品为口色或微黄色结晶体，易溶于水，不溶于丙酮、乙醇，是一种分子量在14〜15kD,等电点pH值在11.0左右，最适效应温度在50°C,最适pH值为6.0〜7.0的碱性球蛋白。它的生物化学功能是催化某些细菌细胞墜多糖的水解，从而溶解这些细菌的细胞璧。溶菌酶的抗菌及抗病毒活力与pH值有关，在酸性介质中，活力显著增强。当前，溶菌酶的制备有多种方法，最常用的是离子交换树脂吸附法⑷。溶菌酶的用途很多，由于它本身是一种天然蛋门质，无毒性，可以作为防腐剂、保鲜剂。在医药上，溶菌

7、酶具有多种药理作用，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的功效，广泛应用于临床医学。溶菌酶是基因工程、细胞工程、发酵工程小必不可少的工具酶，国外多用于菌休内容物质的提取，在发酵工业上是一种重要的溶菌剂，用于破坏细胞壁，制备无菌提取液。溶菌酶所具有的广泛用途吸引了国内外众多学者对其进行研究，已发表不少关于溶菌酶的试验报道。1材料和方法1.1材料与仪器新鲜鸡蛋3颗，购口市场；724型酸性阳离了交换树脂；灭菌纱布；lmol/LNaOH,lmol/LHCl；蒸镭水(实验室桶装水)；磷酸缓冲液(pH6.5,0.15M)；10%(NH4)2S04溶液；固体(NH4

8、)2S04；BaCl2:12%分离胶;4%浓缩胶；Tris-廿氨酸电极缓冲液；loadingBuffer；标准蛋口Marker；染色液(考马斯亮蓝G-250)；脱色液(冰乙酸，甲