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《高效液相色谱法测定发酵液中有机酸_辛梅华》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、,第14尝第4期华侨大学学报自然科学版V时14幽J’UNIVEITYOURNALOFH盯AQIAORS.199310月(NATURALSCIENCE)Oet1993年‘高效液相色谱法测定发酵液中有机酸辛梅华(应甩化学系)摘要建立反相HPLC测定酒石酸、苹果酸、乳酸、醋酸柠像酸的色谱条件,在ODs柱上以。.3mol压.,.,:.10KH沁(pH25)缓冲溶液作流动相10min内完成以上五种有机酸的同时测定检测限低于ng/ml线性范围o一800卜g/ml.,关健词有机酸高效液相色谱法0前言,、、目前习幻和反测定有机酸的主要方法有气相
2、色谱法[1离子色谱法场离子排斥色谱法[’,,。s,相HPLC法[e1各有特点和不足之处本文以最常用的ODS柱(cl烷基键合柱)为固定相研.,究了洗脱液中KH护0浓度及pH对色谱分离的影响建立了分离检测以上五种有机酸的色谱,。、、,条件并用于发酵液中有机酸含量的测定方法简便快速灵敏可用于食品等多种样品中有机酸含量的测定。1实验部分1.1仪器(,6A,1)日本岛津高效液相色谱仪包括LC一6A泵SIL一自动进样器SPD一6AV紫外一,。:,可见分光光度检测器C一R3A数据处理装置(2)色谱柱shim一PackcLc一ODs15cmx6
3、.·,。omm,必5拜m(3)pHS一2型酸度计上海产1.2试剂(l)标准溶液:、、、、,酒石酸柠檬酸DL一苹果酸乳酸冰醋酸配成浓度为lmg/机t的水溶液,.:.‘(0:,‘存于冰箱中用时稀释至所需浓度2)流动相配制3mol/LKHPO缓冲溶液用HaPO调.,#。pH,:.,1000节至255玻璃砂芯漏斗过滤除气(3)样品溶液发醉液经5砂芯漏斗过滤稀释。,。倍后进行分析(4)试剂均在分析纯以上水为二次重蒸水本文1992一10一04收到.448华侨大学学报19931.3分析方法.,n,(,n,流动相流速为lml/mi室温24土2℃
4、)检测波长Z15m进样量20拜l衰减l外标法峰高,。定量分析结果直接由C一R3A打印出2结果与讨论万争,‘2.1流动相离子强度对色谱分离的影响卜牛1.1,--一‘~~~~闷.在反相色谱中流动相加入中性盐能增加流动相的表一~一.o.b.4盯比I.o,。,一面张力从而改变溶质的万值和选择性川由实验发现流侧一一一一..,动相中不添加电解质,直接用水作流动相,在流速为1.sml/~一一一心~一蕊,、一min时各有机酸的保留时间分别为酒石酸16min乳酸n、n、n、4min,gmiDL苹果酸8和15mi柠檬酸18mi醋酸除醋OL」一一一J
5、一一~J~~-一上-00.尸0.,,,一么。刁醉酸外其它有机酸保留时间长且峰形差峰拖尾严重不利C‘、,咋伪)。.,唯于分离和检测加入适量KH护0后保留时间大大缩短峰形见好。1是在流动相的pH为.5,图1KH:PO.浓度对澎的影响图2时各有机酸的容量因.,‘,,::‘、一k:‘:‘流动相KH代)o0504l/L子随KHPO浓度变化关系图由图可见随着KHPOmo.;,‘,pH253,Z‘0.其它条件同图图中浓度的增大各组分的k略有增加但KHPO浓度超过1.,2.D一,3.,.酒石酸苹果酸,,‘03mol乳雌3mol/L后又开始下降本
6、文选择KH护0浓度为/.,.,..4醋酸5柠橡酸6L一苹果酸L进行实验2.2流动相pH、对色绪分离的形响·.0‘,,‘劫1.61.1以3mol/LK风PO水溶液作流动柑用HPO调.工万今‘,:‘节pH试验了各种pH的代HPO飞缓冲溶液对是的影响如2。,,‘,图所示由图可见随着pH增大各有机酸的圣值下降,.pH30,柠檬酸和L一苹果酸的下降幅度最大当>时洗脱.’衅0。,顺序发生了变化这是因为随着流动相pH的增大有机酸,,。.k‘的离子化程度增大亲水性增强结果值减小pH在20...,一,江0,夕主。28之间分离度较好但酸度太低对键合
7、固定相不利本盯文选择pH2.5进行实验。PH‘.图2流动相pH对k的影响23其它亲件选择.,:忽.o3mol流动相KHPO/L(l)温度对色谱分离的影响柱温为40℃时,柠檬酸及..pH22一35;其它条件同图3,,,,L一苹果酸保留时间较短分离度差旦乳酸与醋酸重叠本,.,.,图中1酒石酸2D一苹果酸。文选择分离度较好的室温(24士2℃)进行实验3.乳酸,4.醋酸,5.柠棣酸,(2)流动相流速对色谱分离的影响流动相流速为1.6.L一苹果酸,,;sml/min时洗脱太快色谱峰重叠流速在仅sml/min或.,,.0,,Omsml/mi
8、n时保留时间较长峰拖尾严重不利于分离本实验选择流速为1l/min..n(3)选择有机酸吸收峰最大的UVZ15m作为检测波长进行检测根据以上实验所选的最佳色谱条件测得酒石酸、苹果酸、乳酸、醋酸、柠檬酸的标准色谱,。图如图3所示五种酸在10min内可同时分离测定并且
