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《GBT 5413.19-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 游离生物素的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、GB/T5413-19-1997前言木标准等同采用美国公职分析化学师协会(AOAC)方法。木系列标准从实施之日起，代替GB5413-85.木标准由中国轻工总会提出。木标准由全国乳品标准化中心归日。木标准负责起草单位:国家乳制品质量监督检验中心。木标准参加起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻下业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢(中国)投资服务有限公司。木标准主要起草人:张玉杰、工芸、杨金宝。中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉GB/T5413-19-1997游离生物素的测定代甘CB5413-85Milkp
2、owderandformulafoodsforinfantandyoungchildren--ile亩erminationoffreebionincon宜ent1范围木标准规定了用微生物法测定游离生物素的方法。木标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中游离生物素的测定。2方法原理通过植物乳杆菌(肠d汉.‘t。护la:勿，.)生长情况来测定游离生物素含量。3试剂、菌种和培养基所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1生物素:标准品。3.2乙醉:体积分数为50%.&3菌种:植物乳杆菌(La
3、ctobactillusplantorum).&4培养墓&4.1乳酸杆菌琼脂培养基:光解陈I殆，屏母浸青殆，荀萄钟I飞，番茄汁10O.L,磷酸二氧钾跄，聚III梨糖单油酸酚Ig.琼脂I飞，燕馏水10OOmL,pH6.8士0.2(25)C).&4.2乳酸杆菌肉汤培养基:光解陈l5g,醉母浸青殆，葡萄械log,番茄汁lOOrnL.磷酸二氧钾翔，聚[h梨械单油酸酷18,蒸馏水10OOmL,pH6.8土0.2(2510.&4.3生物素测定用培养基:维生素测定用酪蛋白氨基酸I跑，浦萄糠49g,乙酸钠20g,L-耽氨酸0.饱,DL一
4、色氨酸0.翱.硫酸腺1-1吟20.g,盐敌鸟II吟20mg,尿啥IQ2OFng,盐酸硫肢素2mg,核黄素2-g.烟酸Zmg,泛酸钙2mg,9酸毗哆N72-g,p-氨墓笨pp酸200pg,54酸氧二钾18,磷酸二氧钾Ig,硫酸镁0.4g,盆化钠20rng,硫酸亚铁20.gI硫酸锰20mgI加蒸馏水至I000,nL，pH6.7士0.1(25C).4仪器常用微生物实验室仪器及pH训.5制备5.1菌种的制备5.1.1液体培养基的制备吸取定量的墓础液体培养基，加入等里的燕馏水，舟个培养管分装IO.LI盖上盖,121℃灭菌1&nin
5、.迅速将灭菌管冷却，避免颜色形成。贮于冰箱中。国家技术监普局1997-05-28批准1998-09-01实施GB/T541119-19975.1.2植物乳杆菌(L.d.b-W-pI-i-)贮备管的制备将所用的微生物菌种接种到2个以上琼脂培养塞试管内，在28-40℃之间选择一个恒定温度(士0.5,C)培养6-24h,完成后放入冰箱。在使用新的菌种用于一个测定时，要在1-2周内做几个继代转接。不要用保存一周以上的培养基接种，培养基在保存过程中不要打开。5.1.3接种的准备将植物乳杆菌U-IobactUusplanta，二)(
6、3.3)转接到一个无菌的IO.L液体培养基中，得到一个菌AU液。5.2标准滚液的制备5.2.1生物素标准贮备液:浓度5体8八L.精确称取50-60rng生物素标样(3.1)(从十操器中)，用乙醉(3.2)稀释，得到5U/mL的生物素滚液，贮于冰箱中。5.2.2生物Al标准T作液:浓度0.lng/mL.吸IML标准贮备液(5.2.1),用水稀释到IOoomLI再分别吸此稀释溶液各IML，一个稀释到500mL，作为高浓度标准溶液，一个稀释到IOoomL，作为低浓度标准溶液.侮次现用现配。5.3玻璃仪器的准备使用焰状活性剂对硬
7、玻璃测定管及其他必要的玻璃器IL进行洁洗(月桂磺敌钠.是一种合适的济洗剂)检验微生物对少数生长因了和许多清洗剂具有很高的敏感性，因此，清洗之后要求在250℃十热条件下，加热1-2h.6操作步骤6.1样品的处理6.1.1+粉样品精确称取一定星样品，该样品应含0.2-0.5m‘生物素。继续6.1.3步骤。6.1.2液体样品吸一定量的液体样品，该样品应含0.2-0.5.g生物素。继续6.1.3步绳。6.1.3样品的提取加水，使样品总体积为150,},fi合后，Mlmol/L盐酸iApH为4.5-4.6.定量转到25OmL容量瓶
8、中，用水定容，充分混合，川滤纸过滩，弃去最初的几毫刀，吸5.L滤液，用水定容到10O.L.已2标准曲线的制备按表I顺序加入燕馏水、标准溶液和维生素B"测定用培养基于培养管中，一式三份。表IiXAIMt1*;,N.oL-一到51{25{35{45牛羹{670181)试管No.3-7中加低浓度标准济液,No.8-10中加
