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《GBT5413.19-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 游离生物素的测定 - 下载地址.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、GB/T5413.19-1997前言本标准等同采用美国公职分析化学师协会(AOAC)方法。本系列标准从实施之日起，代替GB5413-85,本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负贵起草单位:国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢(中国)投资服务有限公司。本标准主要起草人:张玉杰、王芸、杨金宝。.www.bzxzk.com.中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉GB/T5413.19-1997游离生物素的测定代替GB5413-85Milkpow
2、derandformulafoodsforinfantandyoungchildren-Determinationoffreebiotincontent1范围本标准规定了用微生物法测定游离生物素的方法。本标准适用于要幼儿配方食品和乳粉中游离生物素的测定。2方法原理通过植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)生长情况来测定游离生物素含量。3试荆、菌种和培并荃所有试剂，如未注明规格，均指分析纯。所有实验用水.如未注明其他要求，均指三级水。31生物素:标准品。3.2乙醉:体积分数为50%.3.3菌种:植物乳杆菌(Lactobacilluspl
3、antoram)p3.4培养墓3.4.1乳酸杆菌琼脂培养基:光解脉15g,酵母浸膏5g,葡萄糖log，番茄汁100mL,磷酸二氢钾2g,聚lU梨搪单油酸酷1g,琼脂log,燕馏水1000mL,pH6.8士0.2(250C),3.4.2乳酸杆菌肉汤培养基:光解陈15g,酵母浸膏5g,葡萄糖log，番茄汁100mL,磷酸二氢钾2g,聚山梨糖单油酸醋1g,燕馏水1000mL,pH6.8士0.2(250C),3.4.3生物素测定用培养基:维生景测定用酪蛋白氨基酸12g,葡萄糖49g，乙酸钠20g,L-胧氨酸。.2g,DL一色氨酸0.2g,硫酸腺嗦吟20mg，盐酸
4、鸟嗦吟20mg，尿IQr20mg,盐酸硫胺素2mg，核黄素2mg.烟酸2mg,泛酸钙2mg,盐酸毗哆醉2mg,P-氨基苯甲酸200pg,磷酸氢二钾1g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.4g,抓化钠20mg,硫酸亚铁20mg，硫酸锰20mg，加燕馏水至l000mL,pH6.7士0.1(250C).4仪器常用微生物实验室仪器及pH计.5制备5.1菌种的制备5.1.1液体培养基的制备吸取定量的基础液体培养基，加人等量的燕馏水，每个培养管分装lOmL，盖上盖,121℃灭菌15min。迅速将灭菌管冷却，避免颜色形成。贮于冰箱中。国家技术监借局1997一05一28批准19
5、98一09一01实施.www.bzxzk.com.GB/T5413.19-19975.1.2植物乳杆菌(Laclobacillusplanlarum)t备管的制备将所用的微生物菌种接种到2个以上琼脂培养基试管内，在28-40℃之间选择一个恒定温度(士。.5C)培养6-24h，完成后放入冰箱。在使用新的菌种用于一个测定时，要在1-2周内做几个继代转接。不要用保存一周以上的培养基接种，培养基在保存过程中不要打开。5.1.3接种的准备将植物乳杆菌(Laclobacillusplanlarum)(3.3)转接到一个无菌的lOmL液体培养基中，得到一个菌悬液。5.
6、2标准溶液的制备5.2.1生物素标准贮备液:浓度50pg/mL,精确称取50-60mg生物素标样(3.1)(从干燥器中)，用乙醇(3.2)稀释，得到50ttg/mL的生物素溶液，贮于冰箱中。5.2.2生物素标准工作液:浓度。，lng/mL.吸1mL标准贮备液(5.2.1)，用水稀释到I000mL，再分别吸此稀释溶液各1mL，一个稀释到500mL，作为高浓度标准溶液，一个稀释到1000mL，作为低浓度标准溶液。每次现用现配。5.3玻璃仪器的准备使用焰状活性剂对硬玻瑞测定管及其他必要的玻璃器皿进行清洗(月桂磺酸钠，是一种合适的清洗剂)检验微生物对少数生长因子
7、和许多清洗剂具有很高的敏感性，因此，清洗之后要求在250℃干热条件下，加热1-2h.6操作步骤6.1样品的处理6.1.，干粉样品精确称取一定量样品，该样品应含。.2-0.5mg生物素。继续6.1.3步骤。6.1.2液体样品吸一定量的液体样品，该样品应含。.2-0.5mg生物素。继续6.1.3步骤。6.1.3样品的提取加水，使样品总体积为150mL,混合后，用lmol/L盐酸调pH为4.5-4.6，定量转到250mL容量瓶中，用水定容，充分混合，用滤纸过滤，弃去最初的几毫升，吸5mL滤液，用水定容到100mLo6.2标准曲线的制备按表1顺序加人蒸馏水、标准
8、溶液和维生素B,s测定用培养基于培养管中，一式三份。表1试管号No.123456
