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《GBT5413.20-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 胆碱的测定法 - 下载地址.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、GB/T5413.20-1997前言本标准参照瑞士雀巢公司的方法。本系列标准从实施之日起，代替GB5413-85,本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负资起草单位:雀巢(中国)投资服务有限公司、国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司。本标准主要起草人:张福才..www.bzxzk.com.中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉Gs/T5413.20-1997胆碱的测定代替GB5413-85Milkpowderandformulafoodsforinfa
2、ntandyoungchildren-Determinationofcholine，范圈本标准规定了胆碱的测定。本标准适用于要幼儿配方食品和乳粉中胆碱的测定。本方法最低检测限度约为2mg/10鲍。2方法原理试样经酸解，过滤，酶氧化后，比色测定。3试荆所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.10.O5mo1/LTris缓冲液(PH8.0):含质量分数0.05%的笨Mo在注入约500mL燕馏水的1000mL容量瓶中溶入6.057g三轻甲基氨基甲烷和0.5g笨阶，再用蒸馏水稀释至刻度。如需要可用6mo1/L的盐酸调pH至8
3、.0,3.2用于酶反应的发色剂在一个50mL容量瓶内溶人7.81mg胆碱氧化酶(12.8U/mg),1.31mg过氧化酶(190U/mg)和7.5mg4-氨基安替比林，用Tris缓冲溶液(3.1)稀释至刻度。3.3标准溶液:含胆碱氢氧化物250pg/mL,在100mL容量瓶中溶入523mg胆碱酒石酸氢盐，用蒸馏水稀释至刻度。用刻度吸管吸取该溶液lOmL于1OOmL容盘瓶中并用燕馏水稀释至刻度。3.41氧化钠溶液:质量分数为60%,3.5盐酸;c(HCt)为3mo1/L,3.6盐酸:c(HCI)为lmol/L,4仪器常用实验室仪器及:4.1回流抽提器。4.2层析
4、柱，长25cm，内径lcm,4.3分光光度计。国家技术监，局1997一05一28批准1998一09一01实施.www.bzxzk.com.GB/T5413.20-19975操作步骇5.，准备试样用混合或研磨的方法将样品均匀化，以。.。坛的精确度准确称量样品，使其胆碱含量约为1-10mg(以氢氧化物计算).5.1.1固体样品称取5g混合均匀的样品于250mL的平底磨口烧瓶中，加人30mL盐酸0.6)，搅拌。5.1.2液体样品称取20g混合均匀的样品于250mL平底磨口烧瓶中，加入lOmL盐酸(3.5),搅拌。5.2水解将装有样品的容器与回流冷凝器连接，在70℃水
5、浴中加热5h，同时磁力搅拌。冷却。用氢氧化钠溶液(0.4)调pH3.4^-3.6。若必要的话再次冷却，并转入50m1一容量瓶中，用燕馏水稀释至刻度。5.弓J过滤过溥水解液(5.2),滤液应是澄清的，如果不澄清，通过。.45pm的滤膜再次过滤。如果因样品的性质得不到澄清滤液，或者过滤困难，建议调pH值至4-4.5，而不是3.4-3.6见5.Z、.声5月兮酶反应每个试样准备3支试管(A,B,C)，按表1加入试剂。表1mL试管A试管B试剂试管C试剂空白滤液空白试样待分析德液0.1000.100燕馏水0.1003.00发色剂3.003.00用密封保护膜盖住试管，振荡。
6、把试管置于37℃水浴中保温反应1Omin,5.5比色测定调整分光光度计波长至505nm，用燕馏水作空白。5.6标准曲线用刻度吸管移2,4,6,8mL标准溶液(0.3)于4支lOmL的容量瓶内，用燕馏水稀释至刻度。准备6支试管，一个试管用作试剂空白(A)，另五支试管由1至5编号，分别用于标准溶液和标准溶液的四个稀释度。按表2加入试剂。表2m1试剂管A管1管2管3管4管5稀释度1(501pg/mL)0.100稀释度2(100pg/mL)0.100稀释度3(150pg/mL)0.100稀释度4(200pg/.L)0.100标准溶液(250pg/.L)0.100燕佃水
7、0.100发色剂333333306.www.bzxzk.com.cB/T5413.20-1997用密封保护膜盖住试管，振荡，置试管于37℃水浴中保温反应10min，然后按5.5以后的步骤操作。6分析结果的表述6.1净透光率的计算通常非新鲜配制的试剂会产生轻微的颜色，且由于水解作用滤液也不是无色的，为了除去这些干扰因素，应从全透光率中减去各自的空白透光率(管A和管B),A=A,.，一Abp一A,.···················⋯⋯(1)式中:A—净透光率;A,.—全透光率(管C);A,—试剂透光率(管A);A.,—抽提液透光率(管B)oAbp和A,，不应
8、大于全透光率的20%，对于标准曲线，A
