DBS32 004-2014 食品安全地方标准 青奥会食品中致病菌快速检测

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1、DBS江苏省地方标准DBS32/004—2014食品安全地方标准青奥会食品中致病菌快速检测2014-06-30发布2014-06-30实施江苏省卫生和计划生育委员会发布DBS32/004—2014前言本标准系首次发布。IDBS32/004—2014青奥会食品中致病菌快速检测1范围本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157：H7、副溶血性弧菌的病原菌自动检测系统检测方法和实时荧光PCR检测方法，以及志贺氏菌实时荧光PCR检测方法。本标准适用于2014年青奥会食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157

2、：H7、副溶血性弧菌的快速检测。其他大型活动可参考本标准执行。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。第一法病原菌自动检测系统检测3原理病原菌自动检测系统利用多聚酶链反应（PCR）扩增目标细菌DNA特异片段，筛选目标菌是否存在。反应所需的引物、DNA聚合酶和单核苷酸等被合并成为一个稳定、干燥的试剂片，装入PCR反应管中，检测系统运用荧光检测来分析PCR产物。PCR试剂片含有荧光染料，能结合双链DNA，受光激发后能发出荧光信号。在检测过程中，病原菌自动检测

3、系统通过测量荧光信号的变化，分析测量数据，判定阳性或阴性结果。4设备和材料4.1病原菌自动检测系统。4.2恒温空气振荡摇床：36℃±1℃、30℃±1℃。4.3加热槽：37℃±1℃、95℃±1℃。4.4冷却槽。4.5天平：感量0.1g。4.6均质器。4.7冰箱：4℃、-20℃。4.8微量移液器：1μL-10μL、10μL-100μL、100μL-1000μL。1DBS32/004—20144.9灭菌吸头：10μL、200μL、1000μL。4.10PCR反应管及支架。4.11pH计或pH试纸。5试剂与培养基5.1水：应符合GB/T6682中一级水的规格，121℃高压灭菌30min。5.2

4、病原菌自动检测系统检测试剂盒（溶菌试剂、试剂片）。5.3培养基5.3.17.5%氯化钠肉汤：见GB4789.10-2010附录A中A.2。5.3.2缓冲蛋白胨水（BPW）：见GB4789.4-2010附录A中A.1。5.3.3亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见GB4789.4-2010附录A中A.3。5.3.4李氏增菌肉汤LB（LB1，LB2）：见GB4789.30-2010附录A中A.3。5.3.5改良EC肉汤：见GB/T4789.36-2008附录A中A.1。5.3.63％氯化钠碱性蛋白胨水：见GB4789.7-2013附录A中A.1。6操作步骤6.1样品制备和增菌培养6.1.1金黄

5、色葡萄球菌金黄色葡萄球菌的样品处理与增菌液按照GB4789.10-2010中第一法5.1进行，增菌液放置于恒温空气振荡摇床中，36℃±1℃、200rpm/min振摇4h。6.1.2沙门氏菌沙门氏菌的样品处理与增菌液按照GB4789.4-2010中5.1前增菌和5.2进行，BPW增菌液放置于恒温空气振荡摇床中，36℃±1℃、200rpm/min振摇2h；移取0.1mL，转接种于SC增菌液，36℃±1℃，200rpm/min振摇4h。6.1.3单核细胞增生李斯特氏菌单核细胞增生李斯特氏菌的样品处理与增菌液按照GB4789.30-2010中5.1进行，LB1增菌液放置于恒温空气振荡摇床中，3

6、0℃±1℃、200rpm/min振摇2h；移取0.1mL，转种于10mLLB2增菌液内，30℃±1℃，200rpm/min振摇4h。6.1.4大肠埃希氏菌O157：H7大肠埃希氏菌O157：H7的样品处理与增菌液按照GB/T4789.36-2008中第一法5.1进行，增菌液放置于恒温空气振荡摇床中，36℃±1℃、200rpm/min振摇4h。2DBS32/004—20146.1.5副溶血性弧菌副溶血性弧菌的样品处理与增菌液按照GB4789.7-2013中5.1进行，增菌液放置于恒温空气振荡摇床中，36℃±1℃、200rpm/min振摇4h。6.1.6所有剩余增菌液均存于2℃～8℃，以备

7、对阳性检测结果的确认。6.2上机操作6.2.1打开加热槽分别至37℃和95℃。检查预冷的冷却槽（4℃）。开机并启动病原菌自动检测系统软件。如果仪器自检后显示“校正”，按屏幕提示进行校正操作。6.2.2溶菌操作将标记好的溶菌管放至管架上，在每支溶菌管加入200μL溶菌试剂。将每个增菌后的5μL样品加入相应的溶菌管中，盖上盖子。把管架放在37℃加热槽中20min。再将管架放在95℃的加热槽中10min。最后将管架放在冷却槽上（冷却槽从冰箱取出后30