大豆磷脂的提取及分析.doc.deflate.doc.gzip

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1、实训二大豆磷脂的提取、分析及卵磷脂咀嚼片的的制备与检验大豆磷脂的提取及含量测定一、试剂与仪器1、试剂⑴氯化锌溶液：精确称取氯化锌6.86g，定容于500ml容量瓶中。⑵大豆市售⑶无水乙醇------10瓶⑷磁力搅拌器⑸对苯二酚溶液：取对苯二酚0.5g，加水适量使溶解，加硫酸1滴，加水稀释成100ml。⑹钼酸铵硫酸试液：取钼酸铵2.5g，加硫酸15ml，加水使溶解成100ml，即得。本液配制后两周即不适用。⑺亚硫酸钠试液：取无水亚硫酸钠20g，加水100ml使溶解，即得。本液应临用新制。⑻磷酸二氢钾⑼浓硫酸⑽过氧化氢⑾石油醚、⑿氯仿、

2、甲醇、冰乙酸⒀20％硫酸铵⒁羧甲基纤维素钠⒂硅胶GF254⒃载玻片2、仪器凯氏烧瓶，恒温水浴锅，滤纸；电热恒温鼓风干燥箱；电热套，天平，分光光度计，刻度比色管，硅胶G板，抽滤装置二、实验操作㈠、大豆磷脂的提取及含量测定1、5斤大豆用粉碎机粉碎得大豆粉2、卵磷脂的提取⑴称取一定质量的大豆粉末，加入一定体积95%的乙醇，置于不同温度的水浴锅内，一定时间后取出，减压过滤。见下表料液比提取时间提取温度氯化锌1:202.535101:201.540151:152.54051:15235151:151.545101:102.545151:101

3、.53551:2024551:1024010(2)试验步骤：将溶有卵磷脂的乙醇溶液置于磁力搅拌器下，一边搅拌一边加入一定量ZnCl2溶液，继续搅拌20min;取出，减压过滤，并将滤液置于蒸发皿上蒸干;取出产品进行定性检测。㈡磷含量测定标准溶液的制备：取105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾约0.13g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取10ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，每1ml中含磷（P)约为30ug。样品溶液的制备：取本品约0.15g，精密称定，置凯氏烧瓶中,加硫酸20ml与硝酸50ml，缓缓加热

4、至溶液呈淡黄色，小心滴加过氧化氢溶液，使溶液褪色，继续加热30分钟，冷却后，转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。测定方法：精密量取对照品溶液与样品溶液各2ml，分别置50ml量瓶中,各依次加入钼酸铵硫酸试液4ml，亚硫酸钠试液2ml与新鲜配制的对苯二酚溶液2ml，加水稀释至刻度，摇匀,暗处放置40分钟，照可见-紫外分光光度法,在620nm的波长处分别测定吸光度，计算含磷量。硅胶薄层板的制备【实验材料】1．器材玻板（5cm×20cm或10cm×20cm，厚度5mm）、直径10cm乳钵、烘箱、干燥器。2．试剂与试药硅胶G，羧甲

5、基纤维素钠。3．0.4%羧甲基纤维素钠的配制：取4g羧甲基纤维素钠加纯净水使成1000ml，室温浸泡过夜，煮沸使其溶解，补足溶剂减少量，即得。4、药棉5、漏斗6、烧杯7、拉板器（药匙）【实验方法】1、临用前将，0．4%羧甲基纤维素钠先用棉花过滤，以除去其中的沉淀不溶物(否则铺板有麻点)。2、按硅胶G-0.4%羧甲基纤维素钠溶液（1：2.5）的比例配好研磨均匀，注意不要有气泡，研磨时向一个方向研磨，然后用机械搅拌一段时间除去里面的气泡，再静置半小时就可以铺板了。3、铺板：将研磨均匀的硅胶倾倒于铺板器内，匀速拉过玻璃板。铺板时，拉铺板器

6、的速度不要过快，也不要太慢。（或者将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。铺板时，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，也可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上，倒时也要注意不要引入小气泡。如有需要，可以双手10个指头托住玻璃板，有节奏的颠簸，使得糊状硅胶分布匀称。）4、涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干后，在120℃烘30分钟（105℃烘120分钟），取出，置干燥器中贮存，临用时取出。卵磷脂薄层色谱实验【实验材料】1．器材10ml量筒、层析缸（大小与所所铺的薄层板相配）、点样毛细管、硅胶G薄层板、显色喷雾

7、瓶、台称、水浴锅、烘箱。2．试剂与试药氯仿、甲醇、冰乙酸、甲醇、95%乙醇、硫酸等。3．10%硫酸乙醇溶液的配制：用量筒量取硫酸10ml，缓慢加至100ml95%乙醇中，摇匀，放冷，即得。【实验方法】1．硅胶薄层板划线；2、取磷脂样品50mg，加入2～3滴石油醚使之溶解，3、照薄层色谱法，用毛细管吸取上述溶液于硅胶G薄层板上；以在氯仿：甲醇：乙酸：水(85：15：10：3，V/V)为展开剂，展开，取出，记录展开剂的前沿位置，晾干，记下展开剂的位置。4、显色向干燥的薄板喷洒20％硫酸铵(加入4ml浓硫酸)，直到薄板变得透明，在220℃

8、下烘烤20min。5、测算Rf值溶质在纸上的移动速度率可用迁移率Rf值表示，Rf值主要决定于被分离物质在两相间的分配系数。在同一条件下，Rf值是个常数，不同物质的Rf值不同，这一性质可作为混合物分离鉴定的依据。薄板显色成功后，对不同斑