基于ITS1-5.8S+rRNA-ITS2序列兔肝球虫PCR检测方法的建立

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1、万方数据4ChineseJournalofRabbitFarming4／2012试验研究基于ITSl—5．8SrRNA—ITS2序列兔肝球虫PCR检测方法的建立闰文朝1，索勋2，薛帮群1(1．河南科技大学动物科技学院，洛阳471003；2．中国农业大学动物医学院，北京100193)摘要：通过对多种鸡球虫和松鼠球虫18SrRNA和28SrRNA进行序列比对分析，在18SrRNA3’端和28SrRNA57端保守区设计艾美耳属通用引物，以斯氏艾美耳球虫洛阳分离株LY卵囊基因组DNA为模板首次成功克隆到斯氏艾美耳球虫完整的ITSl—5．8SrRNA—111s2序列，其大小为1178bp，其中IT

2、Sl序列长度为423bp，5．8SrRNA为155bp，ITS2为600bp，斯氏艾美耳球虫LY株ITSl／2序列高度变异，与鸡球虫、啮齿动物球虫的序列同源性低于60％。然后在斯氏艾美耳球虫ITSl／2序列超变区设计种特异引物，建立了灵敏、特异的PCR检测方法。本研究结果将为兔球虫强致病种的临床诊断和揭示兔球虫种群遗传特征提供有效的分子工具。关键词：家兔；斯氏艾美耳球虫；ITSl—5．8SrRNA—I，I’S2序列；PCR检测中图分类号：S829．1文献标识码：A文章编号：1005—6327(2012)04—0004一05CloningandAnalysisofITSl-5．8SrRNA

3、-ITS2ofEimeriaStiedaiandDevelopmentofPCRDiagnosticAssayBasedontheFragmentYANWen-cha01，SUOXun2,XUEBang-qunlfJ．CollegeofAnimalScienceandTechnology,HenanUniversityofScienceandTechnology,Luoyang471003；2．CollegeofVeterinaryMedicine，ChinaAgricuhuralUniversity,Beijing100193)Abstract：18SrRNAand28SrRNAseq

4、uencesofseveraIEimeriaspeciesfromchickensandsquirrelswerealignedtodesigncommonprimersforEimeriaparasitesfromvarioushostsbasedontheconservedsequencesofboth3，endof18SrRNAand5，endof28SrRNA．1178bpoftheITSl—5．8SrRNA—ITS2completesequenceofE．stiedai，including423bpofITSl，155bpof5．8SrRNA，and600bpofITS2，wa

5、sfirstlyclonedwiththecommonprimersandgenomicDNAofoocystsofLYisolateastemplates．Incontrastto5．8SrRNAfragment．ITSlandITS2sequencesofE．stiedaiLYisolateiSmorevariable．andlessthan60％ofITSlandITS2sequencesofLYisolatewasidenticaltothoseofEimeriaspeciesinchickensandotherrodenthosts．AsensitiveandspecificP

6、CRdiagnosticassaybasedOfftheITSl—5．8SrRNA—ITS2sequencewasdevelopedtoidentifyforE．stiedai，oneofhighpathogenicspeciesfromrabbitsbydesigningspecificprimersforE．stiedaiatthemutativesitesofITS1andITS2．ThesefindingswillprovideapowerfultoolforclinicaldifferentiationofhighpathogenicEimeriaspeciesinrabbit

7、sandrevealingpopulationgeneticcharacteristicsofrabbitcoccidia．Keywords：Domesticrabbits；Eimeriastiedai；ITS1—5．8SrRNA—ITS2sequence；PCRdiagnosticassay收稿日期：2012—03—10基金项目：国家兔产业技术体系项目资助。作者简介：闫文朝(1978-)，男，汉族，河南浙川人，博士，副教授，主要从