羊环形泰勒虫单管套式pcr检测方法的建立及初步应用

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1、中国农学通报2012,28(29):62-65ChineseAgriculturalScienceBulletin羊环形泰勒虫单管套式PCR检测方法的建立及初步应用李丽，王书全，费东亮（辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁锦州121001）摘要：为了建立羊环形泰勒虫单管套式PCR检测方法并初步应用于临床检测。根据GenBank上发表的环形泰勒虫Tams1基因序列，设计内、外2对特异性引物，进行单管套式PCR检测方法研究，并进行了特异性、敏感性试验及临床应用试验。结果表明：该检测方法能够扩增的基因片段大小为476bp，与GenBank收录的相关序列同源性高达93%~98%，而与附

2、红细胞体、新孢子虫、艾美耳球、弓形虫RH株相关病原基因组均无交叉反应，能够检测出DNA的最小量为12fg。并对57份临床样品进行了检测，检测阳性率为40.4%，高于常规PCR和血涂片镜检测，表明该检测方法具有较高的敏感性，可用于羊环形泰勒虫感染的早期诊断，有较好的临床应用价值。关键词：羊环形泰勒虫；Tams1基因；单管套式PCR中图分类号：S855.9文献标志码：A论文编号：2012-1552EstablishmentandPreliminaryApplicationofaSingle-tubeNestedPCRAssayforDetectionofGoatTheile

3、riaannulataLiLi,WangShuquan,FeiDongliang(LiaoningMedicalUniversity,CollegeofAnimalHusbandryandVeterinary,JinzhouLiaoning121001)Abstract:Todevelopasingle-tubenestedPCRassayfordetectionofgoat-derivedTheileriaannulata.AccordingtothepublishedTheileriaannulataTams1genesequenceinGenbank,twopai

4、rsofprimersweredesignedtodevelopnestedPCRassayfordetectingthediseasecausedbygoatTheileriaannulata.Theresultsofverificationexperimentswereshownthatthetargetedgenefragmentwas476bpinlengthandhomologyofnestedPCRproductwas93%to98%,andthisdetectionmethodhadnocrossreactionwithToxoplasma,Neospor

5、acaninum,Eimeria,Eperythrozoonsuis,andthesensitivityoftheassayreachedto12fgofDNA.The40.4%ofpositiveratein127clinicalsampleweredetectedbythesingle-tubenestedPCRassay,higherthanthosebyroutinePCRandmicroscopicexamination.Theresultsrevealedthatthesingle-tubenestedPCRassayhadhigherspecificity

6、,sensitivityanditcouldbeaneffectivedetectionmethodofgoatTheileriaannulata.Keywords:GoatTheileriaannulata;Tams1gene;asingle-tubenestedPCR0引言疗成为控制其传播的关键。目前，该病的检测方法主环形泰勒虫病又被称为热带泰勒虫病，是一种寄生要包括血液涂片染色镜检和血清学诊断方法，但存在[3-5]于动物巨噬细胞、淋巴细胞和红细胞内危害严重的原虫敏感度低，假阳性率高等缺点。随着分子生物学的[1-2]病，临床主要表现为发热、贫血、黄疽、血红蛋白尿。随

7、发展，PCR技术具有简便、快速、灵敏、特异性强等特着养殖规模的扩大，其发病率也逐渐上升，由此造成的点，在对动物疫病快速诊断中得到了越来越广泛的应[6-7][8]损失也不断扩大。据不完全估计，每年全球几十亿只用。Tanaka等设计l对合成寡核苷酸引物，用于瑟羊受到该病的威胁。因此，该病的快速诊断和早期治氏泰勒虫表面蛋白的PCR扩增，可用于对环形泰勒虫第一作者简介：李丽，女，1967年出生，黑龙江哈尔滨人，副教授，硕士，主要从事兽医药理毒理及新兽药研发方面的研究。E-mail：mxll2004@yahoo.com.cn。通讯作者：王书全，男，