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1、生物化学与生物物理进展·金属赘合亲和层析纯化金属硫蛋白‘铁锋茹刚‘’李令媛刘德富‘’茹炳根北,北京京大学生物系,摘典将二价铜离子鳌合在凝胶上制成亲和层析柱锌诱导兔肝和福诱导小鼠肝经匀浆、乙醉处理后上柱,用的醋酸盐缓冲液平衡,再用不同浓度的醋酸盐缓冲液分别洗脱,洗脱,经确定先后为一一可得两个金属硫蛋白峰和分离方法比传统一的凝胶过建离子交换法简单、省时,适于实验室规
2、模分离纯化,,关锐词金属硫蛋白金属鳌合分离纯化,,金属硫蛋白是一离子解离暴露出来的琉基与胶上鳌合的金属,,,类分子量为一富含半胧氨酸残基的离子结合从而使被挂在胶上当,,,金属结合蛋白它广泛存在于动植物体内具提高溶液值可将洗脱下来有重要的生物学功能和应用前景〕!从,典酸材料和方法年首次被发现以来至今分离纯化的方法一直采用凝胶过滤次和阴离子交换层材料与仪器析的方法,们
3、凝胶为瑞一次我们试图采用一次金,,,属鳌合亲和层析和一次凝胶过滤脱盐来简公司产品冰醋,,化的分离纯化方法等化学试剂均为国产分析纯去离一子蒸馏水经公司的班超纯水装置金属鳌合亲和层析是基于各种蛋白质分子,一内的组氨酸、半胧氨酸、色氨酸等残基具有与进一步纯化分子量标准蛋白为一,,许多金属离子发生不同程度的配位结合的特公司产品种蛋白分子量范围在一,‘,一为本室自制产品〔二性在凝胶上结合有适当的金属离子的金属鳌,昆明小鼠和
4、青紫蓝家免由北京大学生物系动物合亲合吸附剂从而使凝胶能选择性地结合暴一露有上述氨基酸残基的蛋白质每分子可房提供采用美国公司的低、、、,,,结合个二价金属离子但由于压层析系统泵紫外监测器记录仪收集、,一中的个半胧氨酸残基全部参与金属离器控制器岛津紫外可见分光光度,一仪本原子吸收光谱仪子的连接并在分子内部形成四面体结构的金属旧,一,,英国电化学溶出分析仪山东电簇所以在一般情况下中既没有组氨酸,和芳香氨基酸,讯七厂
5、冷冻离心机德国也没有游离态琉基能与胶上的金属发生结合作用根据我们从不同来源和不实验方法,装柱将凝胶同因素诱导所得的金属成分分析来看几,又加入,装柱乎所有都含有在中性或弱碱性溶液中与金属结合的能力为一一一国家资助项目〔〕因而我们采用,“北京大学分校生物系,一,,一一弱酸性溶液作为平衡液此时中有部分锌收稿期了修期
6、生物化学与生物物理进展,,,溶液用双蒸水洗柱柱子HCI溶液中该吸收峰消失(曲线3)即在酸性上端蓝色条带长约,再用,溶液中全部Zn被解离.一。。起始平衡缓冲液平衡柱子分离纯化样品后,用,..一,““。洗脱柱子可反复使用,用!可将CuZ+洗脱.再生柱子…!从归、,以L2.2样品制备体重约209昆明小鼠连:,)续4
7、d皮下注射CdCI四次累计注射锡量_,,0.2mg/只;体重约2.6kg青紫蓝家兔皮下’{”5「3nSO,‘注射z累计注射锌量86omg/只分别取、’小鼠、兔肝脏进行匀浆和乙醇沉淀处理[41,沉0「l.,.一.pH4ooae。淀溶于0olml/LNAHA190220260300..,.,入/nm123分离纯化样品液上柱先用pH4o·一,oaeeoolLmlNAHA/洗涤再分别用n一图1zT.M的紫外吸收光谱,..,.pHS2oo005ml/L和pHS203ml/L:..n一,o4拜gzpH7o0lmlLT8/兔肝ZM/ml在一,a。。N
8、AHA,:.,.oae一,:洗脱琉基蛋白洗脱峰分别用分子ePBS2p40001LNA3.Hml/HA,,L碳酸按洗脱..筛凝胶脱盐用004mol/冷冻o0lL.ml/HCI干燥L
