固定化金属离子螯合琼脂糖凝胶制备及其纯化组氨酸标签蛋白的研究

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1、硕士论文固定化金属离子螯合琼脂糖凝胶的制备及其纯化组氨酸标签蛋白的研究摘要固定化金属离子亲和层析是一种纯化蛋白的优良方法。其中，固定化金属离子螯合琼脂糖凝胶纯化组氨酸蛋白的技术，近年来备受关注。这种方法主要利用共价作用固定在微球表面的配基与金属离子形成螫合物，蛋白质通过其表面基团与螯合物的配位作用达到纯化蛋白的目的。具体研究内容如下：1．以琼脂糖凝胶(SepharoseCL．6B)作为载体，环氧氯丙烷为活化剂，分别以亚氨基二乙酸和羧甲基天冬氨酸为螯合配基，制备了亲和层析介质Sepharose．CL．6B-IDA-甜+和SepharoseCL．6B—CM．ASP．C02+。通过SE

2、M分析得出：活化前后，琼脂糖的形貌并未发生改变，这说明琼脂糖微球在活化过程中粒子没有发生变形或破碎。并且探索了镍离子亲和层析介质的影响因素，研究发现：当环氧氯丙烷与基质的体积比为O．5，亚氨基二乙酸与基质的体积比为2，反应时间1h时，琼脂糖的活化效率最高。2．将制备好的Sepharose．CL．6B．IDA-Ni2+和Sepharose．CM-ASP．C02+介质用于纯化小规模六聚组氨酸融合蛋白，与商业化产品Ni．NTA介质进行比较，通过SDS-PAGE分析可知：Ni．IDA介质纯化效果最好，优于CM．ASP．C02十介质和商业化产品Ni-NTA介质，纯化后目标蛋白几乎没有杂质，

3、蛋白经过一次提纯就可得到纯度高的靶向蛋白。3．合成螯合配基．N．(5．氨基．1．羧戊基)．亚氨基二乙酸，通过红外光谱和核磁谱等方法确定了产物的结构，采用N．(5．氨基．1．羧戊基)．亚氨基二乙酸作为螯合配基来纯化蛋白质的实验还有待进一步研究。·制备好的Sepharose．CL．6B．IDA-Ni2+介质可商业化，用于纯化大规模的组氨酸蛋白。关键词：金属螯合层析；琼脂糖凝胶；蛋白质纯化Abstract硕士论文ImmobilizedmetalIonaffinitychromatographyisagoodwayforthepurificationofprotein．Amongthem

4、，immobilizedmetalionchelateSepharoseCL-6B，anewtechnologywhichisusedforthepurificationofHis,-Taggedprotein，hasattractedmuchattentioninrecentyears．Themethodmainlyusesligandswhicharefixedonthesurfaceofmicrospheres，chelatingmetaliontoformchelatecompoundbycovalentinteraction,thentheligandsonthesur

5、faceofproteinattach、析mchelatecompoundthroughthecoordinationeffectbetweenthem．Thespecificresearchcontentsareasfollows：1．Twochelateaffinitychromatographicmediums(SepharoseCL一6B·IDA-NipandSepharose-cL一6B-CM—ASP—C01arepreparedusingSepharoseCL·6Basthecartier,epichlorohydrinastheactivatingagengthei

6、minodiaceticacidandcarboxymethylatedasparticacidaschelatingligands．ItprovesbySEM：theappearanceofScpharoseCL-6Bhasnotchangedafteractivation,andtheagaroseisnotbrokenintheprocessofactivation．ByexploringtheinfluencefactorsofSepharoseCL--6B·-IDA-Ni2+,thestudyfinds：whiletheratiobetweentheepoxychlor

7、opropaneandthematrixisO．5，theratiobetweentheiminodiaceticacidandthematrixis2,andreactiontimeislh，theeffciencyofactivationisbest．2．neypuffysmallscaleHis6·TaggedproteinusingSepharose—CL-6B-IDA-Ni肘andSepharose．CL．6B．CM．ASP．C02+．Theeffectsofthema