多重PCR同时检测病原菌及其耐药基因

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1、中国实验诊断学２０１１年４月第１５卷第４期—６２３—文章编号：１００７－４２８７（２０１１）０４－０６２３－０３多重PCR同时检测病原菌及其耐药基因黄艳飞，鲁辛辛，孙宇峰（首都医科大学附属北京同仁医院检验科，北京１００７３０）摘要：目的建立一种多重PCR方法，在同一扩增体系内同时检测病原菌及其β-内酰胺类耐药基因，探讨采用多重PCR同时鉴定病原菌及其耐药基因的可行性。方法根据细菌基因序列和对β-内酰胺类抗生素耐药特点，设计一对细菌鉴定通用引物和三对β-内酰胺类耐药基因引物，并在同一扩增体系内行PCR扩增。结果MRSA和大肠埃希菌及

2、肺炎克雷伯菌的产酶标准菌株的blamecA、blaTEM、blaSHV和１６S-２３SrRNA基因间隔区（ISR）多重扩增均为阳性，对本实验室内保存的５０株多重耐药的葡萄球菌（包括４０株表型筛查为MRS菌株及１０株非MRS菌株）及３０株ESBLs阳性的大肠埃希菌及３０株肺炎克雷伯菌的多重PCR结果显示：MRS阳性菌株均同时扩增出了葡萄球菌特有的多态性及blamecA指纹图谱，而多重耐药的非MRS菌株也都扩增出了blamecA，ESBLs表型阳性的大肠埃希菌多以blaTEM为主，而肺炎克雷伯菌多以blaSHV为主。结论多重PCR与传

3、统的培养及药敏试验相比敏感、特异、迅速，对于解决难培养或不能培养的微生物的鉴定和药敏试验，是一种很有前景的方法。关键词：多重PCR；耐药性；基因中图分类号：R３７８．９９文献标识码：APathogenicbacteriaandtheirdrugresistancegenesdetectedbymultiplexPCRHUANGYanfei，LUXinxin，SUNYufeng．-（DepartmentofClinicLaboratory，CapitalMedicalUniversityaffiliatedBeijingtongre

4、nhospital，Beijing１００７３０，China）Abstract：ObjectiveTosetupamultiplexPCRmethodtodetectpathogenicbacteriaandtheirdrugresistancegenesinthesameamplificationsystemandresearchthefeasibilityfordetectingpathogenicbacteriaandtheirdrugresistancegenesbymultiplexPCR．MethodsAccording

5、tomicroorganismsandtheirβ-lactamaticgenesequences，fourpairsofprimersweredesignedrespectively，andthePCRwasamplifiedinthesamesystem．ResultsThestandardMRSA，E-coliandKpneutoblamecA，blaTEM，blaSHVandISRwerepositivethroughthemultiplexPCR．Atotalof５０clinicalspecimens’resultsde

6、monstratedthatallStaphylococcusblamecAandISRfingerprintingwerepositivewhilemostofblaTEMinE－coliwerepositiveandmostofblaSHVinKpneuwerepositive．ConclusionMultiplexPCRismoresensitive，specificandrapidthanthetraditionalcultureanddrugsusceptibilitytests．Itwillhaveawideprosp

7、ecttoresolvedifficultcultureandnonculturemicroorganisms．Keywords：multiplexPCR；drugresistance；gene（ChinJLabDiagn，２０１１，１５：０６２３）由于广谱抗生素的广泛、大量应用，致使临床耐雷伯菌，以上菌株经生化和Vitek３２系统鉴定确认，药菌株不断增多，新的耐药机制不断出现，给临床治并经K-B法药敏鉴定为耐药菌株。标准菌株疗带来困难。特别是临床上较多见的MRSA、ATCC２９２１３（金黄色葡萄球菌）、ATCC３５２１８（大肠埃

8、MRSE、MRSH、VRE、产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌）、ATCC５１４４６（大肠埃希菌ESBL＋）、希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和一些非发酵菌的ATCC１３８８３（肺炎克雷伯菌）ATCC７００６０３（肺炎克雷耐药问题，已经成为临床关注的热