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《间歇性低氧对大鼠心室肌细胞短暂外向电流的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生理学报,1999年4月,51(2),181～186181ActaPhysiologicaSinica培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞产生3巨噬细胞集落刺激因子及其受体的表达33333朱鼎良GOGUSEVJMARCHEP(上海第二医科大学附属瑞金医院上海市高血压研究所,上海200025;33法国国家健康医学研究院,90研究单位,巴黎75015;333法国国家科研中心,1482研究单位,巴黎75015)摘 要本研究采用培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs),结果如下:(1)用生物活性检测法发现VSMCs无血清条件培养液可刺激巨噬细胞集落形成,其作用能被抗巨噬细胞集落刺激因子(M
2、CSF)抗体抑制;(2)用免疫细胞化学技术证明VSMCs存在MCSF受体;(3)用North2ernblot技术证明VSMCs有MCSF及其受体的mRNA表达,血清刺激使两者表达明显增强。本研究首次报道了培养大鼠主动脉VSMCs能合成并分泌具有生物活性的MCSF,而且该细胞存在MCSF受体。上述结果提示,MCSF可能以自分泌或旁分泌方式调节VSMCs功能,为研究MCSF对于VSMCs的增殖作用及其机制提供合适的细胞模型。关键词:血管平滑肌细胞;巨噬细胞集落刺激因子;巨噬细胞集落刺激因子受体学科分类号:Q28;Q463 血管平滑肌细胞(vascularsmoothmuscle
3、cells,VSMCs)增殖是动脉粥样硬化、血管再狭窄和高血压等常见血管病变的共同细胞病理机制,有关VSMCs增殖机制的研究已引起广[1,2]泛重视。现已明确,血管细胞,如内皮细胞、VSMCs以及浸润于血管壁内的巨噬细胞和淋巴细胞,能产生多种生长因子及细胞因子。在上述组织局部衍生因子的共同作用下,[1]血管细胞增殖、迁移、细胞外间质代谢改变,最终导致血管壁病变。在众多的细胞因子中,巨噬细胞集落刺激因子(macrophagecolony2stimulatingfactor,MCSF,或CSF21)最初被认[3]为具有调节单核/巨噬细胞增殖、分化等功能。最近一些研究表明,从人、兔
4、动脉粥样[4][5]硬化病变处分离得到的VSMCs,有MCSF基因表达,并有其受体存在,提示MCSF可能在动脉粥样硬化血管损伤机制中起重要作用。高血压与动脉粥样硬化有共同发病机制,最近有人提出MCSF参与是其中一个重要[6]共同环节。有报道提示,MCSF可能与自发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensiverat,[7]SHR)心肌肥厚有关。本研究发现,培养大鼠主动脉VSMCs能合成并分泌MCSF,而且该细胞存在MCSF受体,这为进一步研究MCSF对VSMCs的增殖作用及其机制提供了一个合适的细胞模型。1998203211收稿 1998205220修回3
5、国家自然科学基金(No139670315)资助项目和法国国家科研中心(CNRS)/中国国家自然科学基金会资助对外交流与合作项目(No139711151202)©1995-2005TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved.182生 理 学 报 51卷1 材料和方法111 材料 细胞培养液和胎牛血清(FCS)购自Gibco公司,培养器皿购自Costar公司,人重组MCSF和抗MCSF多克隆抗体购自Genzyme公司,抗c2Fms多克隆抗体购自Santa2Cruz公司,其它试剂购自S
6、igma公司。L6α1成肌细胞株由法国国家科研中心(CNRS)的Leibovitch教授惠赠。112 细胞培养 取10周龄WistarKyoto(WKY)大鼠胸主动脉,去除血管内膜和外膜后,2将中膜剪成1mm大小的组织块,贴片于培养皿底部,用含15%FCS的DMEM培养液培养细胞。细胞生长融合后,用01125%胰蛋白酶消化传代。细胞在光镜下呈典型的峰2谷状表现,电镜下显示胞浆内含有大量肌原纤维,免疫细胞化学染色检查抗α2actin、抗myosin抗体阳性染色。实验采用第4～8代培养细胞。113VSMCs条件培养液 VSMCs在用含10%FCS的DMEM液中培养3～4d后,
7、弃去培养液,用无血清培养液洗2次,以去除可能粘附在细胞表面上的血清,然后用DMEM培养液继续培养2d,收集上清液,离心、过滤后备用。[8]114MCSF生物活性检测 按文献报道方法,根据骨髓细胞液中巨噬细胞在琼脂培养基中受待测物刺激后形成的巨噬细胞集落数目来计算刺激活性。巨噬细胞取自成年C57小鼠骨髓,单核/巨噬细胞集落与粒细胞集落在培养7d后分别用α2naphthylacetate酯酶和chloroacetate酯酶染色加以区别并计数。115 受体免疫细胞化学检测 VSMCs培养在Lab2Tek载
