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1、氨基酸和生物资源2006,28(1):29～32AminoAcids&BioticResources应用SRAP标记对莲藕资源的聚类分析13331121,233刘月光,滕永勇,潘辰,韩延闯,周明全,胡中立(1武汉大学发育生物学教育部重点实验室,武汉,430072;2武汉大学莲藕中心,武汉,430072;3信阳师范学院生命科学学院,河南信阳,464000)摘要:利用一种新的分子标记SRAP技术对17个莲藕品种进行了DNA多态性分析。选取7对引物扩增基因组DNA,共获得168条带,其中159条为多态性条带,每对引物平均提供24个标记信息。由UPMGA
2、方法得到的聚类分析结果表明了17个品种间的遗传关系:(1)亚洲莲与美洲莲之间有明显的差异;(2)在亚洲莲内部,藕莲和花莲有明显的遗传分化,在花莲内部亚洲莲与美洲莲的杂交后代和其它花莲品种之间存在明显的差异;(3)SRAP标记是作分子图谱的好标记,但很难区分遗传关系较近的品种。关键词:莲藕;SRAP中图分类号:Q943文献标识码:A文章编号:1006-8376(2006)01-0029-04莲属(Nelumbo)有两种,一种是开红花与白花17bp,5′端前10个碱基为“填充”序列(fillerse2的亚洲莲(N.nuciferaGaertn.),广
3、泛分布在亚洲和quence),无任何特异组成,接着为CCGG序列,它们大洋洲;另一种是开黄花的美洲莲(N.lutea组成核心序列及3′端3个选择性碱基,对外显子进[1,2]Pers.),主要分布在南北美洲。亚洲莲有几百行特异扩增。下游引物长18bp,5′端前11个碱基个品种,传统的分类方法主要是依据花型、花色、花为“填充”序列,紧接着是AATT,它们组成核心序列茎、植株高矮、莲子和莲蓬的形状、藕的熟性、藕的食及3′端3个选择性碱基,对内含子区域、启动子区域用性、主藕的节数和节间形状等来划分的。由于大进行特异扩增。因个体不同以及物种的内含子、启多数
4、的形态性状易受环境影响,因此莲藕种质资源动子与间隔区长度不等而产生多态性。该标记具有的准确鉴定较为困难。简便、稳定、产率高、便于克隆目标片段的特点,并已[7][9]近年来,以分子标记为重点的植物分子生物学被应用于图谱构建、比较基因组学和遗传多样[10]研究迅猛发展,为研究品种之间的遗传差异提供了性分析。本实验使用SRAP技术对莲藕品种的新的方法和手段,分子标记技术和DNA指纹分析技DNA多态性进行了初步研究,以期为莲藕育种和分术已广泛应用于农作物的种质鉴定。RAPD、ISSR、类等提供一些科学依据。AFLP技术已被大量的运用在莲藕的遗传研究[2～
5、6]上。1材料和方法SRAP标记,相关系列扩增多态性(sequence-1.1材料的来源relatedamplifiedpolymorphism,SRAP)是一种新型本次实验总共使用17个莲藕品种作为研究材的基于PCR的标记系统,由美国加州大学蔬菜作物料,进行SRAP分析,见表1。这17个品种包括亚洲[7]莲和美洲黄莲及它们的杂交后代,其中亚洲莲包括系Li与Quiros博士于2001年提出,又叫基于序列扩增多态性(sequence-basedamplifiedpolymor2中国莲和日本莲,中国莲主要是大面积种植的藕莲[8]品种和花莲品种,因此所
6、研究的材料很典型且具有phism,SBAP)。该标记通过独特的引物设计对ORFs(openreadingframes)进行扩增,上游引物长很强的实用价值。1.2DNA的提取收稿日期:2005-12-08采集莲藕的幼嫩叶子,用液氮磨成粉状,参照作者简介:刘月光,男(1984-),在读本科生;滕永勇,男(1983-)在[4]读本科生。韩延闯等采用的CTAB法,稍加改进,提取基因组3为并列第一作者DNA。33通讯作者(E-mail:huzhongli@whu.edu.cn)。基金来源:国家自然科学基金项目(30471114)、国家科技攻关项目1.3SR
7、AP分析(2002BA546C)、湖北省科技攻关重大项目(2002AA205A)、武汉市-125μL的反应体系:25μmol·LMgCl22.5μL,10科技攻关重点项目(20022005132)资助。-1×buffer2.5μL,10mmol·LdNTPs1μL,50ng/μl·30·刘月光等:应用SRAP标记对莲藕资源的聚类分析表1本研究所用的材料品种编号品种名称类型拉丁名来源1鄂莲2号藕莲Nelumbonuciferacv.‘Elianerhao’湖北武汉大学汉南莲藕基地2鄂莲3号藕莲Nelumbonuciferacv.‘Eliansanh
8、ao’湖北武汉大学汉南莲藕基地3鄂莲4号藕莲Nelumbonuciferacv.‘Eliansihao’湖北武汉大学汉南莲藕基地4新1号
